雙酚A對(duì)大鼠卵巢甾體激素生成影響的初步研究.pdf

1、目的： 雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種常見(jiàn)的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental endocrine disruptors，EEDs)，對(duì)女性生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)有潛在的影響。本文通過(guò)大鼠卵巢內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系，研究BPA對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞睪酮生成和對(duì)細(xì)胞色素P45017a羥化酶(P450c17)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(STAR)mRNA的影響；以及研究BPA

2、對(duì)顆粒細(xì)胞激素生成及芳香化酶(P450arom)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)mRNA的影響，探討B(tài)PA對(duì)女性生殖系統(tǒng)激素生成的影響機(jī)制，論證環(huán)境內(nèi)分泌干擾物BPA影響女性生殖系統(tǒng)生長(zhǎng)，發(fā)育，疾病產(chǎn)生的可能機(jī)理。 方法： 分別采用大鼠的卵泡內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞、顆粒細(xì)胞進(jìn)行體外原代培養(yǎng)，培養(yǎng)72 h后以0、10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>、10<'-4> M五個(gè)不同濃度的B

3、PA作用細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，用超敏感的固相放射免疫方法測(cè)定內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生成的睪酮濃度及顆粒細(xì)胞分泌的雌二醇、孕酮的水平。沉淀細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光實(shí)時(shí)RT-PCR(TaqMan．a(chǎn)ssay)方法測(cè)定卵泡內(nèi)膜細(xì)胞P450c17a、P450Scc二種酶和StAR mRNA表達(dá)水平及顆粒細(xì)胞P450arom、P450Scc二種酶和StAR mRNA表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： BPA

4、刺激原代培養(yǎng)的卵泡內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌，培養(yǎng)液中睪酮水平顯著升高(p<0.05)。睪酮合成相關(guān)的酶的基因表達(dá)水平也升高，在BPA 10<'-4>M劑量組出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。StAR的表達(dá)也顯著增加(p<0.05)。原代培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞孕酮分泌量隨BPA濃度的增加而增加(P<0.05)，但在10<'-4> M劑量組其濃度出現(xiàn)陡降(p<0.01)；而雌二醇的分泌量則隨BPA濃度的增加而下降(p<0.01)。雌孕激素生成相關(guān)基因P

5、450arom mRNA表達(dá)顯著降低；P450Scc表達(dá)量在10<'-7>M到10<'-5>M組逐漸升高(p<0.05)，而10<'-4>組卻出現(xiàn)顯著降低(p<0.01)。StARmRNA表達(dá)則有不同程度的增高(p<0.05)。 結(jié)論： BPA能直接作用于卵巢內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及顆粒細(xì)胞：通過(guò)誘導(dǎo)P450c17a，P450Scc等相關(guān)酶的表達(dá)增加、以及增加類固醇合成的限速因子-StAR的表達(dá)，增加內(nèi)膜細(xì)胞睪酮的合成；通過(guò)作用于