青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳桿菌LT0637對急性期及恢復(fù)期UC的作用和免疫學(xué)機(jī)理分析.pdf

1、目的：
　　 建立DSS誘導(dǎo)的急性期和恢復(fù)期UC小鼠模型，探討青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳桿菌LT0637誘導(dǎo)和維持UC緩解的作用，為臨床UC活動期和緩解期治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 6-8周齡雌性BABL/c小鼠50只，體重20.0±2.0克,隨機(jī)分為急性期正常組(N-7組)、嗜酸乳桿菌LT0637(LT0637-7組)、青春雙歧桿菌BF0624組(BF0624.7組)、柳氮磺胺吡啶組(SASP

2、-7組)和生理鹽水對照組(NS-7組)以及恢復(fù)期N-17組、LT0637-17組、BF0624-17組、SASP-17組和NS-17組共10組，每組5只。采用自由飲用2.5％DSS(分子量3.6萬-5萬)7天建立小鼠UC模型，從實(shí)驗(yàn)第1天開始，給予青春雙歧桿菌(2×108CFU/10g)、嗜酸乳桿菌(2×108CFU/10g)和柳氮磺胺吡啶(15mg/10g)灌胃治療7天(急性期)和17天(恢復(fù)期)，觀察小鼠每天的體重變化和糞便性狀；鄰

3、甲聯(lián)苯胺法檢測小鼠糞便隱血情況；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動物，觀察結(jié)腸大體觀，留取從盲腸至肛門的全段結(jié)腸，測量其長度；HE染色觀測結(jié)腸炎癥情況，并進(jìn)行組織學(xué)評分，評價(jià)不同菌株的益生菌對小鼠UC急性期和恢復(fù)期的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.飲用DSS小鼠出現(xiàn)毛色聳立干枯，精神萎靡，活動減少，大便稀軟甚至腹瀉，并有糞便隱血陽性和體重下降等，經(jīng)LT0637、BF0624和SASP治療后，動物體重下降變緩，腹瀉和糞便隱血情況好轉(zhuǎn)。在急性

4、期LT0637菌株對體重減輕的保護(hù)強(qiáng)于BF0624菌株和SASP，而在恢復(fù)期，BF0624菌株比LT0637菌株和SASP更利于體重恢復(fù)。
　　 2.飲用DSS小鼠疾病活動積分(DAI積分；綜合糞便性狀、隱血和體重變化)顯著增高，LT0637、BF0624和SASP能降低小鼠DAI積分，在急性期各組無明顯差別，恢復(fù)期LT0637和BF0624效果強(qiáng)于SASP。
　　 3.UC急性期小鼠結(jié)腸腸壁變薄，腸道內(nèi)可見不成形糞便和

5、暗紅色血便，結(jié)腸長度較正常小鼠明顯變短(8.10±0.52cm)，而LT0637-7組、BF0624-7組和SASP-7組能阻止結(jié)腸縮短；UC恢復(fù)期小鼠結(jié)腸內(nèi)糞便情況好轉(zhuǎn)，結(jié)腸長度較急性期增加，LT0637-17組、BF0624-17組和SASP-17組結(jié)腸長度增加明顯大于NS-17組，但結(jié)腸長度仍短于N-17組。
　　 4.飲用DSS小鼠結(jié)腸組織在顯微鏡下可見粘膜不完整、隱窩破壞、粘膜出血和少量的炎癥細(xì)胞浸潤。在急性期，BF0

6、624和SASP對結(jié)腸組織學(xué)改變不明顯，僅有LT0637減少隱窩的破壞和粘膜出血；各組的組織學(xué)評分為NS-7組：8.8±1.1，SASP-7組：7.4±1.9，BF0624-7組：7.6+2.5，LT0637-7組：6.0±1.0，N-7組：0。各組組織學(xué)評分均高于N-7組(P<0.05)，而LT0637.7組評分低于NS組(P<0.05)?；謴?fù)期LT0637-17組、BF0624-17組和SASP-17組評分均高于N-17組(P<0.

7、05)，但低于NS-17組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、DSS誘導(dǎo)的UC急性期和恢復(fù)期能出現(xiàn)UC急性發(fā)作和恢復(fù)期的特點(diǎn)，而且死亡率低，適用于輕中度UC急性期和緩解期的模型研究。
　　 2、青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳酸桿菌LT0637株能有效地減輕急性期小鼠UC炎癥并維持恢復(fù)期炎癥的緩解，且嗜酸乳酸桿菌LT0637和青春雙歧桿菌BF0624在急性期和緩解期的作用并不完全相同，LT0637有利于誘

8、導(dǎo)急性期UC的緩解，BF0624有利于緩解期的維持。
　　 目的：
　　 觀察UC小鼠外周血Th細(xì)胞(helper T eells)亞群Th1/Th2比例在急性期和恢復(fù)期的變化，分析青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳桿菌LT0637菌株對UC不同時(shí)期Th細(xì)胞分化的影響。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)動物、分組、模型建立及給藥方案與第一章相同，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)摘眼球采血，使用淋巴細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞，用CD4抗

9、體標(biāo)記Th細(xì)胞膜表面特異性抗體，IL-4抗體和IFN-γ抗體標(biāo)記Th2和Th1細(xì)胞胞內(nèi)相應(yīng)抗原，流式細(xì)胞儀分析小鼠外周血Th細(xì)胞亞群的比例。
　　 結(jié)果：
　　 1.正常小鼠Th1/Th2比例約為0.84-0.96，飲用DSS的小鼠在急性期和恢復(fù)期均表現(xiàn)為比例增高。
　　 2.青春雙歧桿菌BF0624、嗜酸乳桿菌LT0637菌株和SASP治療7天和17天后，Th1/Th2比例均有不同程度的下降，與NS組比較有顯著

10、差別(P<0.05)，且兩株益生菌效果強(qiáng)于SASP(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 DSS誘導(dǎo)的小鼠模型急性期和恢復(fù)期均出現(xiàn)Th1/Th2比例失衡，具體表現(xiàn)為比例增高；青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳桿菌LT0637菌株均可以降低急性期和恢復(fù)期Th1/Th2比例，且其作用強(qiáng)于SASP。
　　 目的：
　　 本部分實(shí)驗(yàn)主要分析青春雙歧桿菌BF0624和嗜酸乳桿菌LT0637菌株治療UC急性期和恢復(fù)期的

11、免疫學(xué)機(jī)制。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)動物、分組、模型的建立和給藥方法同第一章，在急性和恢復(fù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)束是處死動物留取各組結(jié)腸標(biāo)本，免疫印記和半定量RT-PCR技術(shù)檢測小鼠結(jié)腸黏膜內(nèi)細(xì)胞因子TLR2、TLR4、PPARγ、NF-κB和T-bet的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.飲用DSS的小鼠在急性期和恢復(fù)期腸粘膜中TLR2、TLR4、NF—κB和T—bet表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)，PPARγ明顯下調(diào)(

12、P<0.05)。γ
　　 2.給予益生菌和SASP治療后可明顯阻止腸粘膜TLR2、TLR4、NF-κB和T-bet的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)PPARγ表達(dá)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.嗜酸乳桿菌LT0637和青春雙歧桿菌BF0624抑制UC急性期和恢復(fù)期TLR2、TLR4的表達(dá)，減少核轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。
　　 2.嗜酸乳酸桿菌LT0637和青春雙歧桿菌BF0624促進(jìn)PPARγ的表達(dá)，從而減輕腸道炎癥并