手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞凋亡和線粒體功能變化及臨床意義.pdf

1、通過對(duì)經(jīng)歷手術(shù)和麻醉應(yīng)激的患兒外周血淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞線粒體功能的檢測(cè),探討線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在手術(shù)應(yīng)激中的意義.一、手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞凋亡及線粒體功能變化目的:探討手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血淋巴細(xì)胞的凋亡及線粒體功能變化.方法:選擇擇期手術(shù)患兒16例,分別于術(shù)前24小時(shí)、術(shù)后24小時(shí)、術(shù)后72小時(shí)采集外周靜脈血3.5--5ml.用梯度離心法分離出淋巴細(xì)胞,置于RPMI-1640培養(yǎng)基中,培養(yǎng)15小時(shí).加入藻紅蛋白標(biāo)記的抗CD4

2、<'4+>、CD<'8+>作標(biāo)記,分等量兩份分別加入20ug/ml的7-AAD、40nmol/L的DioC6(3)在4℃避光20分鐘染色.再加入20ug/ml放線菌素D,1﹪的多聚甲醛,4℃下保存20分鐘固定.然后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化.二、手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血中性粒細(xì)胞凋亡及線粒體功能變化目的:探討手術(shù)應(yīng)激后兒童外周血中性粒細(xì)胞的凋亡及線粒體功能變化.方法:選擇擇期手術(shù)患兒16例,分別于術(shù)前24小時(shí),術(shù)后24小

3、時(shí),術(shù)后72小時(shí)采集外周血3.5--5ml加入肝素.用梯度離心法分離出中性粒細(xì)胞,置于RPMI-1641培養(yǎng)基中,培養(yǎng)15小時(shí).分等量兩份分別加入20ug/ml的7-AAD、40nmol/L的DioC6(3)在4℃避光20分鐘染色.再加入20ug/ml放線菌素D,1﹪的多聚甲醛,4℃保存20分鐘固定.通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化.三、結(jié)論:1)手術(shù)應(yīng)激使兒童外周血CD<'4+>、CD<'8+>淋巴細(xì)胞凋亡增加,同時(shí)熒光