內(nèi)皮素1基因多態(tài)性與兒童青少年骨肉瘤化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性分析.pdf

1、目的:本研究首次在病例對(duì)照研究中探索ET-1的SNP位點(diǎn)和單倍型與兒童及青少年骨肉瘤的化療耐藥風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。為證明ET-1基因的SNP和單倍型與兒童及青少年骨肉瘤化療耐藥的風(fēng)險(xiǎn)變化之間存在相關(guān)關(guān)系，提供了第一手的證據(jù)，從而為化療耐藥的兒童及青少年骨肉瘤患者在病理生理學(xué)和治療上提出了全新的觀念。
　　方法:本研究分三部分;1.用350對(duì)年齡、性別、腫瘤位置和發(fā)展階段相匹配的兒童青少年骨肉瘤患者進(jìn)行研究。2.苯酚/氯仿法從白細(xì)胞中分

2、離出基因組DNA，并存儲(chǔ)在400毫升的TE中(10mMTris/HCl和1mM EDTA的溶液(pH8.0)。ET-1基因單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè)是通過(guò)ABI3700 DNA分析儀（Applied Biosystems）上進(jìn)行毛細(xì)管電泳寡核苷酸連接測(cè)定。對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)、將rs1800541和rs2070699進(jìn)行配對(duì)LD試驗(yàn)，計(jì)算使用HaploView程序，并對(duì)所得進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;3.將患者手術(shù)切除的骨肉

3、瘤標(biāo)本進(jìn)行POCC，對(duì)POCC進(jìn)行傳代培養(yǎng)，實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定ET-1 mRNA水平，并通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)POCC上清液中細(xì)胞分泌的ET-1水平進(jìn)行測(cè)定，觀察腫瘤壞死百分比。
　　結(jié)果:
　　1.發(fā)現(xiàn)在年齡、性別及腫瘤位置和發(fā)展階段沒(méi)有顯著的差異（表1）。同時(shí)在病例組和對(duì)照組之間，在體重指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、血漿ET-1的水平亦無(wú)顯著差異（表1）。
　　2.在三個(gè)

4、SNPs中，對(duì)照組中的rs5370明顯偏離了Hardy-Weinberg平衡。
　　3.在rs1800541上的G等位基因與新輔助化療的弱反應(yīng)或者化學(xué)耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)降低有顯著相關(guān)性(P＜0.01)，而位于rs2070699上的G等位基因與耐藥風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)的傾向并不明顯，P值位于臨界水平(P=0.06)。
　　4.rs1800541和rs2070699存在較強(qiáng)LD關(guān)系（病例組，D'=0.940，r2=0.885;對(duì)照組，D'=0

5、.925，r2=0.860）。
　　5.2-SNP單倍型TG在病例組中比對(duì)照組的顯著相關(guān)性更常見(jiàn)（P=0.012，校正OR，1.82，95％CI，1.10-5.65），而2-SNP單倍型GT在對(duì)照組中比病例組中的顯著相關(guān)性更常見(jiàn)(P=0.009，調(diào)整后的OR,0.25,95％CI,0.14-0.84)。
　　6.在化療耐藥兒童及青少年骨肉瘤患者中，骨肉瘤細(xì)胞分泌的ET-1水平與腫瘤壞死的百分比具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　

6、　結(jié)論:
　　1.兒童青少年骨肉瘤患者在化療后腫瘤壞死與年齡，性別及腫瘤的位置及階段、體重指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、血漿ET-1無(wú)相關(guān)性。
　　2.rs5370與兒童青少年骨肉瘤化療耐藥的風(fēng)險(xiǎn)無(wú)明顯相關(guān)性。
　　3.rs1800541上的G等位基因與新輔助化療的弱反應(yīng)或者化學(xué)耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)降低有顯著相關(guān)性，而位于rs2070699上的G等位基因與耐藥性風(fēng)險(xiǎn)增加有相關(guān)性的傾向不明顯。
　　4.rs1800541