人腦膠質(zhì)瘤放療抗拒及化療耐藥相關(guān)分子機制研究.pdf

1、第一章　膠質(zhì)瘤DNA-PK、Ku70／Ku86活性與化療藥物敏感性的關(guān)系研究　　目的：探討DNA-PK活性及其亞單位Ku70、Ku86活性和腦膠質(zhì)瘤化療藥物敏感性的關(guān)系。 方法:原代培養(yǎng)36例人腦膠質(zhì)瘤細胞，用MTT法檢測其對6種不同抗癌藥物的敏感性，以半數(shù)有效抑制濃度IC50或者血藥峰濃度下的抑制率IR作為判斷是否敏感的指標(biāo)。提取同一膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本的核蛋白質(zhì)，用TECTDNA-Dependent Protein Kinase

2、 Assay System檢測標(biāo)本的DNA-PK活性；用Ku70／Ku86 DNA Repair Kit檢測標(biāo)本的Ku70／Ku86活性。 結(jié)論:膠質(zhì)瘤標(biāo)本的DNA-PK活性與膠質(zhì)瘤級別有關(guān)，DNA-PK活性與DDP、VCR耐藥性正相關(guān)；DNA-PK活性與Ku86活性正相關(guān)，但是與Ku70活性無關(guān)。Ku86活性與DDP耐藥性正相關(guān)，但Ku70活性與DDP耐藥性之間無顯著相關(guān)。DNA-PK/Ku86活性高低可能是膠質(zhì)瘤化療敏感性的

3、一個新的標(biāo)記物。 第二章　丙戊酸對膠質(zhì)瘤細胞株的增殖抑制作用、放化療增敏作用及其分子機制研究 　　第一節(jié)丙戊酸對膠質(zhì)瘤細胞株的抑制作用及其分子機制研究　　目的：研究VPA對人腦膠質(zhì)瘤細胞株增殖抑制、誘導(dǎo)細胞周期阻滯、凋亡的作用以及周期相關(guān)蛋白的變化。 方法:MTT比色法檢測VPA對10株膠質(zhì)瘤細胞株的細胞殺傷作用；流式細胞術(shù)檢測其對細胞周期動力學(xué)及其對細胞凋亡的影響作用；Western Blotting法檢測膠

4、質(zhì)瘤細胞株在VPA處理后乙?；M氨酸H3(Acetyl-Histone H3)、乙酰化組氨酸H4(Acetyl-Histone H4)以及周期相關(guān)蛋白p16、p21、p27、cyclinD1表達量變化。 結(jié)論:VPA能夠在體外抑制部分膠質(zhì)瘤細胞生長，誘導(dǎo)出現(xiàn)細胞周期阻滯及凋亡，增加Acetyl-Histone H3、Acetyl-Histone H4蛋白水平，增加周期相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白p16、p21、p27蛋白水平，降低cyclinD

5、l蛋白水平。 第二節(jié)　丙戊酸對膠質(zhì)瘤細胞株化療敏感性試驗研究　　目的：探討VPA是否能夠體外增強DDP／TMZ對膠質(zhì)瘤細胞株殺傷性。 方法:MTT法檢測10株膠質(zhì)瘤細胞(SF295、SKMG-1、UW28、SF767、T98-G、U87、UW28、UWR-7、U251、SKMG-4、MGR-2)對化療藥物DDP和TMZ的敏感性，計算藥物對不同細胞的IC50值。MTT法檢測VPA對DDP和TMZ的增敏作用，以增敏倍數(shù)ER

6、的值作為判斷增敏程度的指標(biāo)。 結(jié)論:VPA增加膠質(zhì)瘤細胞株SF295、SKMG-1、UW28、SF767對化療藥物DDP敏感性；增加細胞株U87、UWR7、UW28、SF767對化療藥物TMZ的敏感性。 第三節(jié)　丙戊酸對膠質(zhì)瘤細胞株放療敏感性試驗研究 目的:探討VPA體外對膠質(zhì)瘤細胞株T98-G、SF295、U87放療增敏作用及其相關(guān)分子機制。 方法:試驗分為4組：對照組、藥物處理組、照射組、藥物處理聯(lián)合

7、照射組。流式細胞術(shù)檢測其對細胞周期動力學(xué)及其對細胞凋亡的影響作用；WesternBlotting法檢測膠質(zhì)瘤細胞株周期相關(guān)蛋白表達量變化；克隆形成法檢測細胞增殖存活能力的改變。 結(jié)論:VPA增加膠質(zhì)瘤細胞株T98-G、SF295U87的放射敏感性。對于放射抗拒細胞T98-G、SF295能夠促進其通過G2期；對于放射敏感性細胞L187則能夠增加G2期阻滯，增大藥物濃度促進其通過G2期。VPA能夠抑制照射后細胞周期調(diào)控蛋白磷酸化ch