X射線誘導人腦膠質瘤細胞株MGR2放射抗拒分子機制的比較蛋白質組學研究.pdf

1、目的:分子機制的比較蛋白質組學研究本研究在蛋白質組水平分析X射線誘導人腦膠質瘤細胞株MGR2放射抗拒的分子機制，旨在分析不同放射敏感性的膠質瘤細胞的蛋白質組表達差異，為預測膠質瘤放射治療反應和放療增敏研究提供依據。 采用大劑量間歇照射的方法(2Gy 3次，5Gy、8Gy和10Gy各2次)誘導人腦膠質瘤細胞系MGR2產生具有穩(wěn)定放射抗拒性的細胞亞系MGR2R52，分別測定MGR2和MGR2R52在2Gy照射后的生存率；提取MGR2

2、和MGR2R52及二者照射后繼續(xù)培養(yǎng)48h細胞的總蛋白，分別進行cydye染料標記和膠內差異雙向電泳(2D-DIGE)分離；經Typhoon 9400型多功能激光掃描儀不同波長的激光掃描后，獲取熒光膠內差異表達圖譜，繼而采用Decyder軟件進行圖譜分析；選取2D.DIGE圖譜中差異表達≥1.5倍且P值≤0.001的蛋白質斑點，通過全自動斑點處理工作站切點、酶解和點樣后，使用基質輔助激光解吸/電離-飛行時間質譜儀(MALDI-TOF M

3、S)進行蛋白質的肽指紋圖譜(PMF)鑒定。 MGR2和MGR2R52的SF<,2>分別為0.1 92和0.579(P<0.001)；經DeCyder軟件分析，MGR2與MGR2R52之間共有110個蛋白點強度差異≥1.5倍，其中MGR2在誘導后有26個蛋白表達下調，84個蛋白表達增加；MGR2在照射后48h蛋白質表達無顯著變化；而MGR2R52在照射后48h有13個蛋白表達顯著增高。我們選取了75個與其他蛋白點充分分離的、邊界清

4、晰的蛋白點(有利于提高質譜的鑒定率)，經質譜分析有26個蛋白點成功鑒定，共計23個蛋白包括：細胞骨架相關蛋白如Vinculin、gelsolinisoform b、Unnamed protein product和SYNE1 protein；與應激反應有關的熱休克蛋白如Heat shock 70kDa protein 4L；與RNA翻譯和蛋白質合成有關的蛋白如upstream of NRASisoform 1和Tryptophanyl-T

5、ma synthetase；細胞內吞有關的interferon-induced Mx protein和DYN2-HUMAN[AA 474-870]；與糖代謝有關的 UDP-N-acteylglucosaminepyrophosphorylase 1和Triosephosphate isomerase 1；與蛋白質降解有關的ER.60 protein、ATPase(H+transporting，lysosomal 56/58kD，V1 s

6、ubunit B，isoform 2)、Proteasome activatorsubunit 2和Cathepsin D；與氧化還原有關的DERPl2(dermal papilla derived protein 12)、Biliverdin reductase A和peroxiredoxin 3 isoform b；酯酶如Esteterase D/formylglutathionehydrolase；還有MHC class Ⅰ an

7、tigen HLA-A2、KIAA0494 protein、Annexin I以及未知功能的蛋白如Hypothetical protein等。 1. MGR2R52細胞中Peroxiredoxin 3異構體b、真皮乳頭衍生蛋白12和酯酶D表達增加，增加MGR2R52細胞照射后活性氧族的清除能力，有利于MGR2R52細胞照射后的存活； 2. MGR2R52細胞的糖代謝通路發(fā)生改變，促進還原型輔酶Ⅱ NADPH的生成，增加為

8、過氧化物酶和谷胱甘肽等供氫，有利于活性氧的清除； 3. MGR2R52細胞的蛋白質合成和降解發(fā)生改變，其中溶酶體功能降低有利于減輕放射后Ⅱ型程序性死亡，而蛋白酶體通路的增強促進了細胞抗原的表達，為膠質瘤放療后聯合免疫治療提供了線索和依據； 4. MGR2R52細胞蛋白骨架增加有利于維持細胞結構功能的穩(wěn)定，為放射后的修復提供一個適宜的內環(huán)境； 5． SYNE1在MGR2R52細胞2Gy照射后48h表達增加2倍以上，