替考拉寧對正常兔眼視網膜及房水中細胞因子含量的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　 替考拉寧(Teicoplanin)與萬古霉素、去甲萬古霉素同屬于糖肽類抗生素。替考拉寧對多數金葡菌、肺炎鏈球菌的抗菌作用優(yōu)于萬古霉素,對耐萬古霉素的細菌也仍有抑菌作用,并且本品親脂性為萬古霉素的30～100倍,組織穿透力更強,半衰期更長,具有更持久的抗生素后效應,臨床有效率可高達80-90％。在給藥途徑方面,替考拉寧既可靜脈給藥,也可肌內注射,比萬古霉素更方便、快捷,更易被患者接受。此外,本品的機體耐受性

2、更好,不良反應更輕,尤其是國產替考拉寧的成功應用,更是降低了患者的經濟負擔。因此,在臨床上廣泛受到醫(yī)師們的青睞。
　　 目前替考拉寧在治療感染性疾病仍以全身用藥為主。眼部由于血-眼屏障的存在,在治療細菌性眼內炎時,采用玻璃體腔注藥術能在眼內感染部位迅速達到有效藥物濃度,藥效優(yōu)于全身用藥。然而眼組織尤其是視網膜一般對抗生素的耐受性很小,所以采用此法不僅要熟練操作技術,避免或盡可能的減輕對眼組織的機械性損傷,更要注意注射藥物是否對眼

3、組織有毒性作用。此外一般抗菌藥主要用于對病原菌的抑菌和殺菌,開發(fā)時大多未考慮它們對免疫系統的調節(jié)作用,而眼內腔卻存在著其獨特的免疫抑制微環(huán)境,并且此種環(huán)境的形成主要與房水中的免疫抑制性細胞因子轉化生長因子-β2(TGF-β2)等有關。在急性炎癥期TGF-β2表達發(fā)生改變,可以影響前房免疫抑制環(huán)境,各種細胞因子相繼出現,如IL-1、IL-6、IL-8、HNF-a、IFN-γ等。
　　 基于以上理論和替考拉寧自身諸多優(yōu)點,本品在治療

4、細菌性眼內炎具有良好應用前景,目前替考拉寧在眼局部用藥的相關研究報道少見,尤其是對眼內腔免疫抑制微環(huán)境的影響報道甚少。本課題通過動物實驗觀察玻璃體腔注射替考拉寧對正常眼組織,特別是視網膜的毒性作用,并進一步觀察替考拉寧作為抗菌藥物局部使用是否會引起房水中細胞因子TGF-β2、IFN-γ、IL-6、IL-8表達的改變,影響眼內腔免疫抑制微環(huán)境,為替考拉寧在臨床眼科中的應用提供實驗依據。
　　 研究方法:
　　 60只日本大

5、耳白兔,隨機分成7組,均以右眼為實驗眼,注射體積為0.1ml。A組:替考拉寧0.5mg,B組:替考拉寧1.0mg,C組:替考拉寧2.0mg,D組(對照組):滅菌生理鹽水,E組:替考拉寧1.0mg,F組(陰性對照組):滅菌生理鹽水,G組(陽性對照組):金黃色葡萄球菌標準菌株(ATCC25923)菌懸液104cfu/ml。A～D組每組6只,用于檢測視網膜毒性;E～G組每組12只,用于測定細胞因子含量。術后觀察各實驗眼眼前節(jié)及眼后節(jié)情況,A～

6、D組術后第14、28天分批處死動物,取眼球標本做組織病理切片,在光學顯微鏡下觀察視網膜組織結構的變化。E～G組于術前、術后第1、2、3、7、14、28天分別抽取房水0.1～0.2ml,采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法測定房水中TGF-β2、IFN-γ、IL-6、IL-8含量的變化。
　　 采用SPSS17.0統計學軟件處理實驗數據,以均數±標準差表示。P＜0

7、.05認為有統計學意義。
　　 結果:
　　 1裂隙燈檢查
　　 術后A、B、D、E、F組各實驗眼眼前節(jié)均未見明顯炎癥反應,C組實驗眼(2眼/6眼)有輕度炎癥表現,G組炎癥表現明顯。
　　 2直接檢眼鏡檢查
　　 術后A、B、D、E、F組各實驗眼眼后節(jié)均未見明顯炎癥反應,C、G組各實驗眼眼后節(jié)可見顯著改變。
　　 3視網膜標本病理組織觀察
　　 B組(替考拉寧1.0mg)和C組(替

8、考拉寧2.0mg)組織病理切片光鏡檢查出現不同程度病理改變,并以C組引起的視網膜細胞損害最為嚴重。
　　 4 TGF-β2含量變化
　　 E組(替考拉寧1.0mg)和F組(生理鹽水)房水中TGF-β2含量在術前分別為403.86±2.93pg/ml和403.83±2.30pg/ml,術后均呈現下降,第3天分別下降到336.51±2.49pg/ml和338.50±1.25pg/ml,之后回升,第28天仍低于術前含量。在同一

9、測量時間點上,E組房水中TGF-β2含量與F組分別比較均無顯著性差異。G組(金黃色葡萄球菌)房水中TGF-β2含量在術前為403.67±2.52 pg/ml,術后呈現下降,第2天下降到293.99±1.93pg/ml,之后回升,第28天仍低于術前含量。G組房水中TGF-β2在各時間點的含量明顯低于F組,有顯著性差異(P＜0.05)。在同組中,術前TGF-β2含量與術后各時間點TGF-β2含量分別比較,E組、F組和G組均存在顯著性差異(P

10、＜0.05)。5 IFN-γ、IL-6、IL-8含量變化
　　 術前房水中IFN-γ、IL-6、IL-8含量E組(替考拉寧1.0 mg)分別為340.41±17.36pg/ml、46.40±1.87pg/ml和44.73±1.37pg/ml,F組(生理鹽水)分別為340.10±13.78pg/ml、46.56±1.86pg/ml和44.59±0.52pg/ml。術后各因子均呈現上升,第1天E組分別達421.79±10.54pg/

11、ml、57.844±1.48pg/ml和52.10±1.40pg/ml,F組分別達421.81±12.08pg/ml、58.38±0.99pg/ml和52.20±1.32pg/ml。之后下降,第28天IFN-γ、IL-6的含量基本回歸術前水平,但IL-8的含量仍高于術前。在同一測量時間點上,E組房水中IFN-γ、IL-6、IL-8含量與F組分別比較均無顯著性差異。
　　 G組(金黃色葡萄球菌)房水中IFN-γ、IL-6、IL-8

12、含量在術前分別為341.03±14.83pg/ml、45.90±3:2.03pg/ml、44.64±0.88pg/ml,在術后呈現上升,IFN-γ的含量第1天達507.55±18.18pg/ml,IL-6的含量第2天達61.81±2.18pg/ml,IL-8的含量第3天達65.60±1.07pg/ml,之后下降,第28天IFN-γ、IL-6的含量基本回歸術前水平,但IL-8的含量仍高于術前。在同-N量時間點上,G組IFN-γ含量在第1、

13、2、3、7、14天均高于F組,有顯著性差異(P＜0.05),IL-6、IL-8含量在第2、3、7、14、28天均高于F組,有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 在同組中,術前IFN-γ、IL-6、IL-8含量與術后各時間點的含量分別比較:
　　 IFN-γ:E組在術后1天、3天、7天、14天均有顯著性差異(P＜0.05),F組在術后1天、7天、14天均有顯著性差異(P＜0.05),G組在術后1天、2天、3天、7天、14天

14、均有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 IL-6:E組在術后1天、2天、7天均有顯著性差異(P＜0.05),F組在術后1天、2天、3天、7天均有顯著性差異(P＜0.05),G組在術后1天、2天、3天、7天、14天均有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 IL-8:E組在術后1天、3天、7天、14、28天均有顯著性差異(P＜0.05),F組和G組均存在顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.玻璃

15、體腔注射替考拉寧對視網膜的毒性作用隨著用藥劑量的增加而增大,0.5mg時檢眼鏡下及光鏡下未見視網膜毒性改變,可能是較為安全的眼內注射劑量。
　　 2.玻璃體腔注射替考拉寧1.0mg與生理鹽水對照組相比對房水內細胞因子TGF-β2、IFN-γ、IL-6、IL-8的含量無影響,但與術前相比會引起細胞因子含量不同程度的改變。
　　 3.玻璃體腔注射金黃色葡萄球菌可以引起房水內細胞因子TGF-β2的含量降低,IFN-γ、IL-6