海水對(duì)兔眼視網(wǎng)膜功能及形態(tài)學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察海水進(jìn)入兔眼玻璃體后早期視網(wǎng)膜功能和形態(tài)學(xué)變化，探討海水對(duì)視網(wǎng)膜功能的影響和可能的作用機(jī)制，為海水對(duì)視網(wǎng)膜損傷的臨床傷情評(píng)估和救治預(yù)案提供參考建議。 方法：健康無(wú)眼疾新西蘭白兔48只，體重2.5～3.0kg。隨機(jī)選擇其中40只建立動(dòng)物模型：于兔右眼顳上方平行于角膜緣5mm處用穿刺刀作一長(zhǎng)約3mm鞏膜穿通傷，剪除流出的玻璃體，向玻璃體中央部注入1ml實(shí)驗(yàn)用人工海水，6-0尼龍線縫合鞏膜傷口。同樣方法向左眼玻璃體內(nèi)注入1m

2、I平衡鹽溶液（balanced salt solution，BSS）作為自身對(duì)照。按傷后30min、2h、6h、12h、24h隨機(jī)分成5組，每組8只，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)經(jīng)暗適應(yīng)F-ERG檢查后摘除眼球行光鏡、電鏡檢查觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)變化；TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)法測(cè)定Bcl-2、Bax蛋白在各組視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)水平。另外8只兔不作任何處理，為正常組。F-ERG檢測(cè)數(shù)據(jù)、細(xì)胞原位凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平

3、數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和對(duì)比分析。 結(jié)果： （1）BSS對(duì)照組和正常組F-ERG b波振幅值無(wú)顯著性差異，海水組傷后b波振幅隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，自傷后6h開(kāi)始與BSS對(duì)照組相比較有顯著性差異（P<0.05），且海水組傷后2h、6h和12h之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），傷后12h和24h相比較無(wú)顯著性差異。 （2）視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)變化：BSS對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)與正常組相比未見(jiàn)明顯病理改變。光鏡下海水組傷后

4、6h見(jiàn)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞、內(nèi)核層細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿腫脹，明顯空泡變性。12h見(jiàn)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的錐桿層結(jié)構(gòu)改變較明顯，外核層細(xì)胞排列不規(guī)則，內(nèi)核層明顯空泡變性，細(xì)胞數(shù)目明顯減少，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核數(shù)目明顯減少。透射電鏡下，海水2h組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和雙極細(xì)胞大部分核膜凹陷，視錐、視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤排列紊亂，傷后6h見(jiàn)光感受器外節(jié)膜盤線粒體腫脹呈球形，嵴斷裂，12h即見(jiàn)內(nèi)核層細(xì)胞核染色質(zhì)固縮明顯，部分核碎裂。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核膜凹陷，染色質(zhì)濃集。

5、 （3）細(xì)胞凋亡及免疫組織化學(xué)觀察：正常組及BSS對(duì)照組視網(wǎng)膜組織中僅見(jiàn)個(gè)別TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，海水組在傷后30min組視網(wǎng)膜組織中僅發(fā)現(xiàn)少量TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞；6h組在視網(wǎng)膜內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層棕黃色著色的細(xì)胞明顯增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05），并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增加，傷后12h總的凋亡細(xì)胞數(shù)目基本達(dá)到高峰值。海水組傷后30min和2hBcl-2蛋白表達(dá)暫時(shí)性升高，6h及以后時(shí)間其表達(dá)下降，且低于對(duì)照組，

6、與同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）。在海水組Bax蛋白表達(dá)隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸升高趨勢(shì)，6h及以后各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比較有顯著性差異（P<0.05）。對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)Bax蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化，和正常組比較無(wú)顯著性差異。海水組Bcl-2/Bax的比率隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降。 結(jié)論： （1）海水進(jìn)入兔眼玻璃體6h后引起視網(wǎng)膜功能損傷，隨時(shí)間延長(zhǎng)，視網(wǎng)膜功能損傷加重。 （2）海水進(jìn)入兔眼玻璃體后光鏡下觀察視網(wǎng)

7、膜組織在2h即出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變，6h細(xì)胞形態(tài)改變明顯，12-24h即出現(xiàn)不可逆改變，內(nèi)核層及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)目減少。透射電鏡觀察，海水2h組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和雙極細(xì)胞大部分核膜凹陷，視錐、視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤排列紊亂。6h組視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤出現(xiàn)彎曲、分離、碎解及空泡變，內(nèi)節(jié)線粒體腫脹呈球形變。12h出現(xiàn)視網(wǎng)膜細(xì)胞核染色質(zhì)濃集、核固縮。 （3）海水進(jìn)入玻璃體后對(duì)視網(wǎng)膜組織造成損傷，視網(wǎng)膜組織細(xì)胞存在異常凋亡，Bcl-2和Bax在細(xì)胞凋亡機(jī)制