促紅細(xì)胞生成素預(yù)處理對(duì)兔肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究促紅細(xì)胞生成素(EPO)預(yù)處理對(duì)兔離體肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用并探討其在缺血再灌注損傷過程中對(duì)肺保護(hù)的作用機(jī)制,從而為臨床肺保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:采用離體兔肺缺血再灌注損傷模型,將48只健康新西蘭大白兔隨機(jī)分成3組,即對(duì)照組(Control group,C組)、缺血再灌注組(Ischemia-reprefusion group,IR組)及EPO預(yù)處理組(Erythropoietin preconditioni

2、ng group,EP組),每組16只。C組開胸后未給予缺血處理,直接同種異體血灌注2h。EP組、IR組24h前經(jīng)靜脈分別注射給予5000u/kg EPO及等量的生理鹽水進(jìn)行預(yù)處理,用4℃低鉀右旋糖苷(LPD)液灌洗和保存肺,在4℃條件下保存6h。6h后以同種異體兔血再灌注2h。各組分別與缺血后1h(T1)、再灌注時(shí)(T2)、再灌注后1h(T3)、2h(T4)留取肺組織標(biāo)本待檢。檢測指標(biāo):
　　 1.TUNEL法檢測肺細(xì)胞的凋亡

3、情況。
　　 2.烘干法檢測肺濕/干重比(W/D)。
　　 3.檢測肺組織中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。
　　 4.免疫組織化學(xué)法檢測肺組織中caspase-3蛋白表達(dá)。
　　 5.分別用光鏡及透視電鏡觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.TUNEL檢測結(jié)果示:再灌注后IR組、EP組細(xì)胞凋亡指數(shù)較C組增高(p<0.05或p<0.01),但EP

4、組細(xì)胞AI與IR組相比明顯下降(p<0.05)。
　　 2.與C組相比,剛開始灌注時(shí)IR組、EP組肺組織W/D值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),再灌注后,IR組、EP組肺組織W/D值升高(p<0.05或p<0.01)；與IR組相比,EP組肺組織W/D值下降(p<0.05或p<0.01)。
　　 3.與C組相比,在剛開始灌注時(shí)及再灌注后,IR組肺組織中的MDA含量升高(p<0.05或p<0.01)；EP組再灌注后,肺組織MD

5、A含量升高(p<0.05或p<0.01)；但與IR相比,EP組肺組織MDA含量降低(p<0.05或p<0.01)。與C組相比,剛開始灌注及再灌注后,IR組肺組織SOD活力降低(p<0.05或p<0.01),EP組再灌注后SOD活力降低(p<0.05)；但與IR相比,肺組織SOD活力升高(p<0.05)。
　　 4.肺組織中caspase-3表達(dá),剛開始灌注時(shí),IR組與C組相比升高(p<0.05)；再灌注后,IR組、EP組顯著增高

6、(p<0.01或p<0.05)；2h后,EP組與IR組相比降低(p<0.05)。光鏡下示:對(duì)照組僅有很少量的棕黃色陽性產(chǎn)物,IR組及EP組發(fā)現(xiàn)大量的棕黃色陽性產(chǎn)物,但EP組較IR組明顯較少。
　　 5.光鏡下:C組肺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常；IR組肺組織出現(xiàn)彌漫改變,肺泡細(xì)胞腫脹,肺泡間質(zhì)水腫、充血及炎癥反應(yīng)明顯,肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血及白細(xì)胞聚集；EP組肺組織細(xì)胞損傷較IR組明顯減輕,肺泡腔內(nèi)滲出明顯減少,白細(xì)胞聚集減少。透視電鏡下:

7、C組Ⅰ型、Ⅱ型肺泡細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常；IR組Ⅰ型肺泡細(xì)胞扁平,基底膜.增厚,胞漿出現(xiàn)空泡；Ⅱ型肺泡細(xì)胞微絨毛減少,線粒體腫脹,線粒體嵴減少,嗜鋨性板層小體減少；內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,基底膜增厚,細(xì)胞間隙增寬,染色質(zhì)聚集,核變性壞死。EP組Ⅰ型及Ⅱ型肺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常,核染色質(zhì)邊集,線粒體呈圓形或橢圓形,嵴清楚,微絨毛及板層小體結(jié)構(gòu)未見明顯改變,少數(shù)線粒體可出現(xiàn)腫脹,內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹,基底膜基本正常。
　　 結(jié)論: