促紅細胞生成素對脊髓缺血再灌注損傷保護作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：缺血-再灌注損傷(Ischemia-reperfusioninjury，I-RI)是一種常見的脊髓損傷(spinalcordinjury，SCI)類型，可引起嚴重的運動感覺障礙。近年來，其發(fā)病率有上升的趨勢，引起了眾多學(xué)者的注意和重視，就脊髓缺血再灌注損傷(Spinalcordischemia-reperfusioninjury,SCIRI)的防治進行了廣泛深入的研究。目前研究表明，中樞神經(jīng)組織缺血-再灌注時，各種原因引起的神經(jīng)細

2、胞的凋亡或壞死，是其損傷機制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如何減少神經(jīng)元壞死或凋亡，是SCIRI救治的關(guān)鍵因素之一。 針對缺血-再灌注損傷的機理，特別是其引起的神經(jīng)細胞凋亡或壞死，一些藥物被用于SCIRI的防治，主要包括自由基清除劑、鈣離子通道阻滯劑和白細胞粘附抑制劑等，均有一定的效果，但并非十分令人滿意。 EPO是一種作用于骨髓造血細胞，促進紅系祖細胞增生、分化，最終成熟的內(nèi)分泌激素，但近年來的研究發(fā)現(xiàn)EPO對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Centra

3、lnervoussystem，CNS)損傷有很強的保護作用而備受關(guān)注，實驗證明EPO在CNS是一個新的有發(fā)展前景的神經(jīng)保護劑。 本實驗通過SCIRI模型，觀察外源性rhEPO損傷脊髓的保護作用，并對其機制進行探討。 方法： 1.建立大鼠SCIRI模型，應(yīng)用RT-PCR和免疫熒光組織化學(xué)方法觀察損傷脊髓內(nèi)EPOmRNA及EPO-RmRNA的表達情況。 2.建立兔SCIRI模型，并將動物分為A：單純脊髓損傷組

4、、B：rhEPO處理組、C：地塞米松處理組、D：正常對照組。采用Jacobs神經(jīng)功能評定方法，觀察各組動物不同時相點神經(jīng)功能情況，通過HE染色及電鏡觀察各組脊髓組織的改變。 3.應(yīng)用TUNEL法觀察各組動物脊髓的神經(jīng)細胞凋亡情況。 4.采用免疫熒光組織化學(xué)方法觀察各組動物脊髓的Bcl-2和Bax的表達變化情況。 結(jié)果： 1.大鼠SCIRI后48h，EPOmRNA及EPORmRNA表達的吸光度比值分別由正常

5、對照的0.107±0.017、0.289±0.023上調(diào)到0.173±0.032和0.725±0.109。比正常對照組增加61.7％和150.9％(P＜0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示SCIRI后EPOR表達明顯增加。2.通過兔SCIRI模型，發(fā)現(xiàn)rhEPO處理組神經(jīng)功能評分明顯高于損傷組及地塞米松處理組。組織病理亦反映rhEPO處理組神經(jīng)細胞損壞情況好于上述2組。3.各組凋亡指數(shù)：A組：33.37±4.84，B組：9.41±2.86，C組

6、：26.85±5.38，顯然.rhEPO處理組細胞凋亡數(shù)量較損傷組及地塞米松處理組明顯下降(P＜0.01)。4.Bcl-2、Bax表達情況。Bcl-2：A組：12.57±3.60；B組：43.00±7.16；C組：17.29±3.99；rhEPO處理組Bcl-2表達明顯強于損傷組、地塞米松處理組(P＜0.01)。Bax：A組：45.28±6.82；B組：14.57±3.31；C組：36.29±7.63；rhEPO處理組Bax表達明顯弱于

7、損傷組及地塞米松處理組(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.脊髓組織中存在EPO及EPOR，且SCIRI后EPOR的表達較正常對照明顯上調(diào)。 2.外源性EPO能增強脊髓組織對缺血性損害的耐受能力，能明顯改善動物因SCIRI所引起的神經(jīng)行為學(xué)改變和病理學(xué)變化。 3.細胞凋亡在SCIRI中發(fā)揮重要作用，外源性EPO能減輕因SCIRI所導(dǎo)致的脊髓神經(jīng)細胞凋亡。 4.外源性EPO減輕SCIRI所導(dǎo)致的神經(jīng)細胞凋