促紅細胞生成素后處理對大鼠再灌注損傷肺的保護作用及機制.pdf

1、目的:
　　探討外源性促紅細胞生成素后處理對再灌注損傷肺的保護作用及機制。
　　方法:
　　1.把40只實驗的雄性大鼠（體重200～250g）隨機分成5組，每組有8只:即假手術對照組（C組）、肺缺血/再灌注組(LIR組)、肺缺血/再灌注+促紅細胞生成素組(EPO組)、促紅細胞生成素+溶劑對照組1（0.4％DMSO的PBS溶液）（D組）、促紅細胞生成素+U0126（U組）。腹腔注射5％水合氯醛，麻醉后仰臥固定在鼠臺，予以

2、氣管插管，機械通氣，左側開胸，游離左肺門，動脈夾夾閉，復制在體大鼠原位單肺缺血/再灌注模型。C組游離左肺門后不夾閉肺門，觀察150min; I/R組游離并夾閉左肺門造成缺血30min，松開動脈夾再灌注120min;EPO組在再灌注同時尾靜脈注射促紅細胞生成素3000U/kg，其余操作同LIR組;D組缺血前給予7.5ml/kg體重的0.4％DMSO的PBS溶液，余同EPO組;U組缺血前尾靜脈注射ERK1/2信號轉導通路的特異拮抗劑0.3m

3、g/kgU0126（0.3mgU0126溶于7.5m10.4％DMSO的PBS溶液）。
　　2.實驗后取頸動脈血檢測血清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓過氧化物酶(MPO)活性等生化指標的變化。
　　3.采用原位末端標記法(TUNEL)檢測肺組織凋亡情況，并計算凋亡指數(shù)(AI)。
　　4.取肺組織測肺的濕/干重比(W/D)。
　　5.免疫組織化學、RT-PCR法測定肺組織Bcl-2、Bax及

4、Bcl-2mRNA、BaxmRNA表達。
　　6.在光鏡及電子顯微鏡下觀察肺組織形態(tài)學結構的改變，并測定肺損傷組織學定量評價指標(IQA)。
　　結果:
　　1.與C組比較，LIR組血清SOD活力顯著降低，MDA含量、MPO活力顯著升高(P均＜0.01);EPO組、D組、U組與LIR組相比，MDA含量、MPO活力顯著降低，SOD活力升高(P＜0.05或P＜0.01);D組與EPO組比較兩者無明顯差異(P均＞0.05)，

5、U組與EPO組相比，SOD活力顯著降低，MDA含量、MPO活力顯著升高（P均＜0.01）。
　　2.與C組比較，LIR組肺組織W/D、IQA值顯著升高(P均＜0.01）;EPO組、D組、U組與LIR組相比，肺組織W/D、IQA值顯著降低(P均＜0.01）;D組與EPO組相比，W/D、IQA值無明顯差異(P均＞0.05），U組與EPO組相比，U組肺組織W/D、IQA值顯著升高（P均＜0.01）。
　　3.TUNEL法測得，LI

6、R凋亡指數(shù)顯著高于C組，D組、U組、EPO組AI顯著低于LIR組（P均＜0.01），D組與EPO組相比無明顯差異(P＞0.05），U組顯著高于EPO組。
　　4.免疫組化檢測各組肺組織Bcl-2、Bax蛋白顯示:在C組Bcl-2呈高水平表達、Bax表達不明顯，LIR組表達較C組Bcl-2表達明顯下降、Bax明顯上調，同時Bcl-2/Bax的比值降低（P均＜0.01）;與LIR組比較，D組、U組、EPO組Bcl-2蛋白表達增強，Ba

7、x表達減弱，Bcl-2/Bax的比值增高(P均＜0.01）;與EPO組相比，D組無明顯差異（P＞0.05），U組Bcl-2蛋白表達下降、Bax上調，同時Bcl-2/Bax的比值降低（P均＜0.01）。Bcl-2與Bax陽性細胞主要分布于血管內皮細胞、肺泡上皮細胞及支氣管上皮細胞。
　　5.RT-PCR檢測肺組織Bcl-2、Bax mRN顯示:在C組Bcl-2 mRNA呈高水平表達、Bax mRNA表達不明顯;LIR組較C組Bcl-

8、2 mRNA表達明顯下降、BaxmRNA明顯上調，同時Bcl-2/Bax的比值降低（P均＜0.01）;與LIR組比較，D組、U組、EPO組Bcl-2 mRNA表達增強，Bax mRNA表達減弱，同時Bcl-2/Bax的比值升高(P＜0.05或P＜0.01);與EPO組相比，D組無明顯差異（P＞0.05），U組Bcl-2 mRNA蛋白表達下降、Bax mRNA上調，同時Bcl-2/Bax的比值降低(P＜0.01)。
　　6.光鏡檢查

9、:C組肺間質及肺泡細胞結構基本正常，未見明顯炎性細胞;LIR組肺組織出現(xiàn)彌漫改變，肺間質水腫，肺泡內可見較多紅細胞滲出，炎癥細胞浸潤，偶可見肺部實性變;D組、EPO組與LIR組比較，肺組織細胞損傷明顯減輕，肺間質水腫減輕，肺泡內紅細胞滲出減少，炎癥細胞聚集減少;U組肺組織細胞損傷較EPO組加重，炎癥細胞浸潤增多，肺泡內紅細胞滲出增多，肺間質水腫加重。
　　7.電鏡觀察發(fā)現(xiàn):C組肺泡Ⅰ型、Ⅱ型上皮細胞和毛細血管內皮細胞結構正常;LI

10、R組肺內毛細血管腔塌陷，肺泡腔中有大量滲出，巨噬細胞活躍，Ⅰ型肺泡上皮細胞水腫，吞飲小泡減少，細胞核固縮，核內染色質邊集，Ⅱ型肺泡上皮細胞絨毛減少，線粒體水腫，線粒體脊消失，核膜擴張，細胞核固縮，板層小體減少、空泡化并大量脫落到肺泡腔內;EPO組肺內細胞損傷明顯減輕，毛細血管腔光滑，未見塌陷，血管內皮細胞剝落減少，細胞核比較疏松，肺泡腔內滲出減少，巨噬細胞活躍，Ⅰ型肺泡上皮細胞吞飲小泡增加，Ⅱ型肺泡上皮細胞絨毛脫落減少，板層小體增加，線

11、粒體水腫減輕，線粒體脊可見;D組肺組織損傷明顯減輕，血管內皮細胞輕度腫脹，肺泡腔內滲出減少，巨噬細胞不活躍，Ⅰ型肺泡上皮細胞吞飲小泡增加，微絨毛及板層小體結構未見明顯改變，肺泡隔較正常厚;U組肺組織損傷較EPO組加重，肺內毛細血管腔內部分塌陷，巨噬細胞活躍，肺泡腔內有滲出，Ⅰ型肺泡上皮細胞吞飲小泡有減少，Ⅱ型肺泡上皮細胞絨毛有所減少。
　　結論:
　　促紅細胞生成素可能通過抑制中性粒細胞的激活、聚集，提高機體的抗氧化能力，激