脂多糖對(duì)葡聚糖硫酸鈉所致炎癥性腸病的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景:炎癥性腸病(IBD),包括慢性復(fù)發(fā)性炎癥疾病,克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC),是一種病因和發(fā)病機(jī)制都尚未完全明確的非特異炎癥性疾病。近年來(lái),在世界范圍內(nèi),IBD的發(fā)病率和死亡率逐年上升。該病病理變化復(fù)雜,臨床癥狀多樣,若未及時(shí)得到緩解及治愈,引發(fā)為癌變的可能性極大。因此,被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治疾病之一。
　　目前該疾病認(rèn)為是環(huán)境、遺傳、腸道共生菌、免疫等多因素共同作用所致,其中免疫功能紊亂被認(rèn)為是重要的因素之一。

2、Toll樣受體-4(TLR4)是一種重要的病原模式識(shí)別受體(PRR),在啟動(dòng)固有免疫時(shí)發(fā)揮重要作用,且是連接固有免疫和獲得性免疫的橋梁,被稱作是炎癥反應(yīng)的閘門。近年來(lái),TLR4信號(hào)通路在IBD中的作用被廣泛研究,其過度激活會(huì)導(dǎo)致免疫反應(yīng)的異常調(diào)節(jié),從而產(chǎn)生持續(xù)擴(kuò)大的炎癥反應(yīng)。
　　脂多糖(lipo poly saccharide,LPS),TLR4重要配體之一,是一種革蘭陰性菌細(xì)胞壁中的一種成分,也是一個(gè)促炎性因子,當(dāng)其與TLR4

3、結(jié)合時(shí),會(huì)啟動(dòng)TLR4的一系列通路,激活固有免疫應(yīng)答,引起炎癥反應(yīng)。但近期有研究表明,LPS在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的IBD模型中,對(duì)IBD有一定的保護(hù)作用,具體作用機(jī)制尚不清楚。
　　目的:本課題通過研究不同劑量的LPS對(duì)DSS誘導(dǎo)的IBD作用,觀察LPS在DSS誘導(dǎo)的IBD模型中的抗炎作用及機(jī)制;通過組織病理學(xué)分析觀察各組小鼠結(jié)腸的病理?yè)p傷變化,采用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)樹突狀細(xì)胞(DC)表型的變化,Westernbl

4、ot及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的方法分別檢測(cè)相關(guān)組織中TLR4及其下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白及基因的表達(dá)變化,探討不同劑量的LPS對(duì)DSS誘導(dǎo)的IBD的作用機(jī)制,闡明LPS對(duì)IBD是否有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:首先,將LPS分為單次給予組及多次給予組,其中LPS單次給予組在給小鼠飲用3％DSS前的第7天分別每只腹腔注射,LPS多次給予組在給小鼠飲用3%DSS前的第7天和第0天分別每只腹腔注射,注射劑量為10μg/只。

5、　　其次,在Balb/c小鼠體內(nèi)建立DSS誘導(dǎo)的IBD模型,連續(xù)造模7天后,通過每天觀察小鼠的體重變化、死亡情況、糞便狀態(tài)等指標(biāo)以及結(jié)腸組織的病理學(xué)損傷分析來(lái)探討不同劑量的LPS對(duì)DSS誘導(dǎo)的IBD模型的作用。
　　再次,通過采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樹突狀細(xì)胞(DC)表型的變化,Westernblot及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分析TLR4及其下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白及基因的表達(dá)變化來(lái)探討不同劑量的LPS對(duì)DSS誘導(dǎo)的IBD的作用機(jī)制。

6、>　　結(jié)果:LPS單次給予組表現(xiàn)出對(duì)DSS誘導(dǎo)的IBD模型有一定的保護(hù)作用,可以減輕結(jié)腸的炎癥反應(yīng)。與模型對(duì)照組和LPS多次給予組相比,LPS單次給予組小鼠的體重下降和DAI評(píng)分均較低;結(jié)腸組織的病理學(xué)分析顯示,LPS單次給予組的小鼠,結(jié)腸粘膜的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較模型對(duì)照組和LPS多次給予組輕;而且,經(jīng)LPS單次處理的IBD小鼠DC表面低表達(dá)CD86和MHC-Ⅱ共刺激分子,TLR4蛋白及下游信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)量也均下調(diào)。