整合子及孔蛋白OmpF對(duì)耐頭孢西丁大腸埃希氏菌耐藥表型的影響.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文整合子及孔蛋白OmpF對(duì)耐頭孢西丁大腸埃希氏菌耐藥表型的影響姓名：陸思靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：呼吸內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：劉又寧20060526軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文整合子及孔蛋白0，IlpF對(duì)耐頭孢西丁大腸埃希菌耐藥表型的影響中文摘要目的研究臨床分離的59株耐頭孢西丁大腸埃希菌整合子的結(jié)構(gòu)分布及其在耐藥基因播散中的作用；檢測(cè)是否有孔蛋白及其基因ompF缺失；進(jìn)一步探明整合子及孔蛋白o(hù)mpF對(duì)大腸埃希菌

2、耐藥表型的影響，以指導(dǎo)臨床抗生素的選擇及耐藥流行情況的監(jiān)測(cè)方法1)設(shè)計(jì)一種第一，二和三類整合酶基因(imI)的簡(jiǎn)并引物，應(yīng)用PcR方法對(duì)臨床分離的s9株耐頭孢西丁的大腸埃希菌進(jìn)行整合酶基因篩選2)對(duì)于整合酶基因陽性的菌株，再利用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(RFLP)進(jìn)行分型3)PcR技術(shù)檢測(cè)整合子基因盒，應(yīng)用PcR定位技術(shù)和DN^測(cè)序研究整合子插入耐藥基因的情況4)PcR產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果直接在GeneBank中(http：／／宵慨ncbin

3、l札nihgov／BL^sT／)進(jìn)行序列比對(duì)分析5)對(duì)相同長(zhǎng)度片段的可變區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物用DraI和EcoRV雙酶切，確定是否攜帶相同的耐藥基因盒6)用^型超純質(zhì)粒提取及細(xì)菌基因組DN^，J、量快速提取試劑盒從整合酶基因陽性菌株分別提取質(zhì)拉和細(xì)菌基因組DN^，然后分別PcR，確定整合子的基因定位7)利用PcR試驗(yàn)擴(kuò)增孔蛋白基因ompF，提取外膜蛋白，行sDsP^GE電泳檢測(cè)分析8)采用微量稀釋法測(cè)定22種抗生素對(duì)59株頭孢西丁耐藥的大腸埃希菌

4、的最低抑茵濃度結(jié)果1)59株耐頭孢西丁的大腸埃希菌中有45株整合酶基因擴(kuò)增陽性，經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定均為I類整合酶基因2)可變區(qū)擴(kuò)增陽性產(chǎn)物，有6種不同長(zhǎng)度片段，有36株出現(xiàn)1664bp條帶，測(cè)序結(jié)果為舍有2個(gè)開放閱讀框，與耐藥基因盒aadA5和dfrl7100％同源分別對(duì)氨基糖苷類抗生素壯觀霉素，鏈霉素和磺胺類藥物甲氧氨芐嘧啶產(chǎn)生耐藥，Genbank登陸號(hào)分別為^Y748452，^Y82855l；2株出現(xiàn)1913bp條帶，測(cè)序結(jié)果為整合子