中藥“連黃”對大腸埃希菌耐藥基因AcrA影響的初步研究.pdf

1、中藥“連黃”（精提，粗提）是本實驗室以多味中藥按照不同的配比方法，經(jīng)過了大量的動物實驗而篩選出來的科學組方。本研究采用聚合酶鏈式反應（PCR）及實時熒光定量 PCR法，通過耐藥基因失活試驗，檢測中藥“連黃”（精提，粗提）對大腸埃希菌的耐藥基因AcrA的影響，通過對中藥“連黃”（精提，粗提）作用前后的各耐藥菌株耐藥基因AcrA的mRNA表達水平進行定量檢測并比較分析，研究中藥“連黃”（精提，粗提）對大腸埃希菌耐藥基因AcrA的mRNA表達

2、水平的影響，初步探討中藥“連黃”降低多重耐藥大腸埃希菌耐藥性的作用機制。
　　由瓊脂平板點種法結果可知，中藥“連黃”（精提，粗提）對耐藥大腸埃希菌 DL1的抑制率與敏感菌 K88比較差異不顯著（P>0.05），對 NUT的抑制率與 K88比較差異顯著（p<0.05）。并且精提制劑與粗提制劑比較差異極顯著(p<0.01)。PCR法擴增的DL1的AcrA基因與ECU00734的AcrA基因同源性達100％；其相應的氨基酸序列同源性達1

3、00%；表明實驗室成功擴增出大腸埃希菌耐藥基因AcrA；NUT與ECU00734的AcrA基因同源性達99%。NUT與 ECU00734的同源性達98%。中藥“連黃”（精提，粗提）作用前后大腸埃希菌的耐藥基因 AcrA突變位點較集中，在608-693堿基區(qū)內發(fā)生較大改變，其對應的氨基酸序列也發(fā)生改變，且出現(xiàn)了氨基酸缺失。經(jīng)實時熒光定量 PCR法定量檢測的菌株 DL1、NUT的AcrA mRNA的表達量與相應的中藥“連黃”（精提，粗提）作

4、用前菌株比較均發(fā)生了不同程度的降低。并且精提制劑比粗提制劑對AcrA mRNA的表達量影響更大，mRNA的表達量降低程度更明顯。
　　中藥“連黃”（精提，粗提）在亞抑菌濃度下可有效的降低大腸埃希菌的四環(huán)素類，氯霉素類和喹諾酮類藥物的耐藥性；其降低多重耐藥大腸埃希菌耐藥性的作用機制是由于改變了其耐藥基因AcrA的部分堿基，使AcrA基因 mRNA的表達量發(fā)生改變，中藥“連黃”（精提，粗提）在亞抑菌濃度下對大腸埃希菌耐藥基因AcrA的