金黃色葡萄球菌RAP重組蛋白的高效表達及其體內活性的檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的構建金黃色葡萄球菌RNAⅢ激活蛋白(RNAⅢ-activatingprotein，RAP)重組蛋白表達載體RAP-pQE30，誘導其在大腸桿菌SG13009內表達，制取重組蛋白并進行純化，同時檢測其體內活性。 方法經PCR從金黃色葡萄球菌基因組中克隆出編碼RAP蛋白的基因，轉化TG1菌株，提取質粒后測序；隨后構建RAP-pQE30重組蛋白表達質粒，轉化表達菌株SG13009，用IPTG誘導表達重組蛋白，而后用6×HisNi-

2、NTA親和柱純化RAP蛋白。將純化的蛋白作為抗原對小鼠進行皮下注射，再用金黃色葡萄球菌感染小鼠，觀察RAP蛋白是否有預防金黃色葡萄球菌感染的作用。 結果在經IPTG誘導的RAP-pQE30/SG13009全菌蛋白中檢測到相對分子量大小約為40KD的RAP重組蛋白，經純化后明顯。將注射純化RAP蛋白組小鼠和對照組小鼠比較，發(fā)現(xiàn)注射RAP組小鼠感染的發(fā)生率小、感染的損傷程度輕。 結論成功表達并純化了RAP蛋白，且證實它有預防

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