姜黃素對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝病大鼠腸道屏障功能的影響.pdf

1、目的:探討姜黃素對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)大鼠腸道屏障功能的影響。
　　方法:26只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(normal chow diet，NC;n=8)和高脂組(n=18)。NC組予以普通飼料，高脂組給予45％脂肪能量的高脂飼料。12周末，高脂組隨機(jī)處死3只大鼠，驗(yàn)證非酒精性脂肪肝造模成功后，隨機(jī)將高脂組分為高脂對(duì)照組(high

2、 fatdiet，HFD;n=7)和高脂姜黃素治療組（high fat diet+curcumin，HFD+Cur;n=8），HFD+Cur組繼續(xù)高脂飲食，并給予200mg·kg-1·d-1姜黃素灌胃;NC組及HFD組均給予等體積的0.5％的羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethylcellulose，CMC)灌胃，共4周。第16周末，處死各組大鼠，留取血樣、肝組織、腸道組織。測(cè)量肝濕重，計(jì)算肝指數(shù)，檢測(cè)肝功能;采用蘇木素

3、-伊紅(Hematoxylin&eosin，HE)和油紅O染色(oil red staining，ORO)觀察肝臟組織脂肪變病理變化;采用ELISA法檢測(cè)血清炎癥相關(guān)細(xì)胞因子如脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、腫瘤壞死因子-α(transforming growth factor-beta，TNF-α)水平及反應(yīng)腸道粘膜屏障功能的血漿二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)的活性程度;電子顯微鏡觀察回腸

4、粘膜屏障的通透性的變化;免疫組織化學(xué)法測(cè)定回腸組織緊密連接蛋白Occludin、Zonula occludens protein-1(Zo-1)蛋白含量;Westemblot檢測(cè)小腸組織Toll樣受體4(Toll-like receptors4，TLR4)、磷酸化轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(phosphorylated NuclearFactor-kappa B，p-NF-κB)、緊密連接蛋白Occludin蛋白的水平。
　　結(jié)果:1、

5、與NC組比較，HFD組血清AST、ALT水平，肝指數(shù)，肝臟TG含量顯著升高(P＜0.05);HE及油紅染色提示: HFD組存在肝臟脂肪變性及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　2、與NC組比較，HFD組血漿DAO活性程度升高，血清LPS、TNF-α水平顯著增加(P＜0.05);電鏡下HFD組腸黏膜上皮細(xì)胞排列紊亂，微絨毛稀少，分布不均;HFD組腸道TLR4/P-NF-κB蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，緊密連接蛋白Occludin表達(dá)下降(P＜

6、0.05);免疫組化提示HFD組腸道緊密連接蛋白Occludin及ZO-1表達(dá)減少，分布異常。
　　3、與HFD組相比，HFD+Cur組血清AST、ALT水平，肝指數(shù)，肝臟TG含量明顯降低(P＜0.05);HE及油紅染色提示:Curcumin組肝臟脂肪變性及炎癥程度均較HFD組減輕。
　　4、與HFD組相比，HFD+Cur組血漿DAO活性降低，血清LPS、TNF-α水平下降(P＜0.05);電鏡下HFD+Cur組腸黏膜上皮細(xì)

7、胞排列整齊，微絨毛分布均勻;HFD+Cur組腸道TLR4/P-NF-κB蛋白表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，緊密連接蛋白Occludin表達(dá)上調(diào)(P＜0.05);免疫組化提示HFD+Cur組腸道緊密連接蛋白Occludin及ZO-1表達(dá)增加，呈連續(xù)性分布。
　　結(jié)論:1、高脂飲食大鼠肥胖并出現(xiàn)NAFLD，可能與高脂飲食破壞腸道緊密連接，增加腸道通透性及炎癥因子入血有關(guān);腸道TLR4/P-NF-κB通路激活，可能導(dǎo)致腸道中緊密連接蛋白