P53N未端激活區(qū)與肌動(dòng)蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域分析.pdf

1、肌動(dòng)蛋白廣泛存在于真核細(xì)胞中，參與細(xì)胞的各種功能。在細(xì)胞質(zhì)中，肌動(dòng)蛋白微絲參與細(xì)胞變形運(yùn)動(dòng)、肌肉收縮、胞質(zhì)分裂，形態(tài)維持等。肌動(dòng)蛋白也普遍存在于細(xì)胞核中，它在細(xì)胞核中的作用已經(jīng)獲得了比較深入的了解。研究表明，肌動(dòng)蛋白能參與染色質(zhì)改構(gòu)，基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，RNA的加工與運(yùn)輸以及DNA損傷修復(fù)和有絲分裂等。肌動(dòng)蛋白通常以聚合態(tài)F-Acfin，寡聚體及單體G-Actin形式存在，F(xiàn)-Actin存在于細(xì)胞質(zhì)中，G-Actin主要存在于細(xì)胞核中，F(xiàn)-A

2、ctin和G-Actin可以相互轉(zhuǎn)換。
　　P53是一種抑癌基因，也是一種高效的轉(zhuǎn)錄因子，P53可以被表觀修飾，如磷酸化和乙?；?，15位點(diǎn)絲氨酸、18位點(diǎn)蘇氨酸和20位點(diǎn)絲氨酸就是重要磷酸化位點(diǎn)，并能在P53與其它蛋白質(zhì)相互作用時(shí)起作用，調(diào)控下游基因的表達(dá)。正常細(xì)胞中，P53處于低表達(dá)狀態(tài)，但在腫瘤細(xì)胞或DNA損傷細(xì)胞中，P53被活化，入核參與細(xì)胞周期抑制，基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，細(xì)胞程序性死亡等生理過(guò)程。在腫瘤細(xì)胞中，P53大多是發(fā)生突

3、變的。不同結(jié)構(gòu)的肌動(dòng)蛋白能否在腫瘤細(xì)胞中參與突變的P53介導(dǎo)的生理過(guò)程目前還不清楚。
　　本文主要討論了正常狀態(tài)下，在P53缺陷細(xì)胞P53(-/-)中，肌動(dòng)蛋白是否能與P53相互作用，共同完成一定的生理過(guò)程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肌動(dòng)蛋白能在P53缺陷細(xì)胞PC3(P53-/-)中，與P53相互作用，這種作用在15、18和20這三個(gè)位點(diǎn)氨基酸共同突變成丙氨酸后消失了。用抑制肌動(dòng)蛋白解聚的藥物jasplakinolide和抑制肌動(dòng)蛋白聚合的藥

4、物細(xì)胞松弛素D處理轉(zhuǎn)染了P53及其系列突變體質(zhì)粒的PC3(P53-/-)細(xì)胞，通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討了P53及其系列突變體蛋白與肌動(dòng)蛋白的作用情況。結(jié)果表明P53及S15A，T18A，S20A單位點(diǎn)突變不能影響P53與F-Actin肌動(dòng)蛋白的結(jié)合，但轉(zhuǎn)錄激活區(qū)前1-41個(gè)氨基酸缺失及15，18，20三個(gè)位點(diǎn)全突變的P53也能與F-Actin結(jié)合，P53及S15A，T18A，S20A單位點(diǎn)突變體能與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，前1-41個(gè)氨基酸