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文檔簡介
1、同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文端粒酶與膀胱腫瘤關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究姓名:高興成申請學(xué)位級別:博士專業(yè):泌尿外科指導(dǎo)教師:章詠裳2000.5.1胱腫瘤。4)、Ni寸AN胱腫瘤T24細(xì)胞系誘導(dǎo)分化時(shí)端粒酶活性的變化及其與細(xì)胞周期動力學(xué)改變的關(guān)系。,K方法國1)、在TRAP法的基礎(chǔ)之上,建立尿脫落細(xì)胞端粒酶活性PCR—ELISA檢測法,并應(yīng)用PCR—ELISA法檢測7例正常人、26例非膀胱腫瘤(17例前列腺增生、9例泌尿系感染)患者、53例膀胱腫瘤
2、患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性,并將兩者檢測的陽性率結(jié)果與病理檢查結(jié)果進(jìn)行比較。2)、同時(shí)JH端粒酶活性PCR—ELISA檢測法和尿細(xì)胞學(xué)法對膀胱腫瘤患者尿脫落細(xì)胞進(jìn)行檢測,比較兩者的差異。3)、設(shè)計(jì)并合成兩條針對端粒酶RNA模板區(qū)的asONs片段,用PCRELlSA法檢測其對培養(yǎng)的T24細(xì)胞系端粒酶活性的影響:用MTT法檢測其對T24細(xì)胞系增殖活性的影響。4)、用全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)分化人膀胱腫瘤T24細(xì)胞系細(xì)胞,用PCRELIS
3、A方法檢測T24細(xì)胞系分化后端粒酶活性的變化,用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期動力學(xué)改變。K結(jié)果目1)、正常人尿液端粒酶活性均呈陰性,非膀胱腫瘤患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性陽性率為769%(2/26),膀胱腫瘤患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性陽性率為6415%(34/53),各組之間差異有極顯著性(P0001)、但端粒酶活性與腫瘤的分期分級無相關(guān)性。2)、PCRELISA法檢測膀胱腫瘤患者尿脫落細(xì)胞端粒酶活性的總陽性率642%,明顯高于尿細(xì)胞學(xué)檢查總陽
4、性率396%,兩者比較有極顯著性(Po001)。在低級膀胱腫瘤中(G1、)中,端粒酶活性的陽性率為556%,尿細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率為154%,差異具有極顯著性(PO001)。3)、與端粒酶RNA模板區(qū)完全互補(bǔ)的asON;t片段能夠抑制培養(yǎng)的T24細(xì)胞株的端粒酶活性并且能夠抑制T24細(xì)胞株的增殖活性。經(jīng)不同濃度(OuM、5pM、lOuM)asONl處理后T24細(xì)胞系端粒酶活性受到抑制,吸光度A值分別為O780100D、0240140D、01
5、30110D;經(jīng)lOuMasONl處理1、3、5、7天,T24細(xì)胞的增殖活性逐漸下降,A值分別為0590110D、0390090D、02l0020D、0190070D,各組之間經(jīng)檢驗(yàn)差異有極顯著性(pO001)。4)、T24細(xì)胞系細(xì)胞經(jīng)ATRA誘導(dǎo)分化后,細(xì)胞周期動力學(xué)發(fā)生改變:S期細(xì)胞所占比例逐漸降低,G0/G1期細(xì)胞所占比例逐漸增加:端粒酶活性被明顯抑制,與對照組比較,ATRA處理后l、3、5、7天端粒酶活性抑制率分別為109%、3
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