端粒酶與膀胱腫瘤關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究.pdf

1、同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文端粒酶與膀胱腫瘤關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究姓名：高興成申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：泌尿外科指導(dǎo)教師：章詠裳2000.5.1胱腫瘤。4)、Ni寸AN胱腫瘤T24細(xì)胞系誘導(dǎo)分化時(shí)端粒酶活性的變化及其與細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)改變的關(guān)系。，K方法國(guó)1)、在TRAP法的基礎(chǔ)之上，建立尿脫落細(xì)胞端粒酶活性PCR—ELISA檢測(cè)法，并應(yīng)用PCR—ELISA法檢測(cè)7例正常人、26例非膀胱腫瘤(17例前列腺增生、9例泌尿系感染)患者、53例膀胱腫瘤

2、患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性，并將兩者檢測(cè)的陽(yáng)性率結(jié)果與病理檢查結(jié)果進(jìn)行比較。2)、同時(shí)JH端粒酶活性PCR—ELISA檢測(cè)法和尿細(xì)胞學(xué)法對(duì)膀胱腫瘤患者尿脫落細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，比較兩者的差異。3)、設(shè)計(jì)并合成兩條針對(duì)端粒酶RNA模板區(qū)的asONs片段，用PCRELlSA法檢測(cè)其對(duì)培養(yǎng)的T24細(xì)胞系端粒酶活性的影響：用MTT法檢測(cè)其對(duì)T24細(xì)胞系增殖活性的影響。4)、用全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)分化人膀胱腫瘤T24細(xì)胞系細(xì)胞，用PCRELIS

3、A方法檢測(cè)T24細(xì)胞系分化后端粒酶活性的變化，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)改變。K結(jié)果目1)、正常人尿液端粒酶活性均呈陰性，非膀胱腫瘤患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性陽(yáng)性率為769％(2／26)，膀胱腫瘤患者尿液脫落細(xì)胞端粒酶活性陽(yáng)性率為6415％(34／53)，各組之間差異有極顯著性(P0001)、但端粒酶活性與腫瘤的分期分級(jí)無(wú)相關(guān)性。2)、PCRELISA法檢測(cè)膀胱腫瘤患者尿脫落細(xì)胞端粒酶活性的總陽(yáng)性率642％，明顯高于尿細(xì)胞學(xué)檢查總陽(yáng)

4、性率396％，兩者比較有極顯著性(Po001)。在低級(jí)膀胱腫瘤中(G1、)中，端粒酶活性的陽(yáng)性率為556％，尿細(xì)胞學(xué)檢查的陽(yáng)性率為154％，差異具有極顯著性(PO001)。3)、與端粒酶RNA模板區(qū)完全互補(bǔ)的asON；t片段能夠抑制培養(yǎng)的T24細(xì)胞株的端粒酶活性并且能夠抑制T24細(xì)胞株的增殖活性。經(jīng)不同濃度(OuM、5pM、lOuM)asONl處理后T24細(xì)胞系端粒酶活性受到抑制，吸光度A值分別為O780100D、0240140D、01

5、30110D；經(jīng)lOuMasONl處理1、3、5、7天，T24細(xì)胞的增殖活性逐漸下降，A值分別為0590110D、0390090D、02l0020D、0190070D，各組之間經(jīng)檢驗(yàn)差異有極顯著性(pO001)。4)、T24細(xì)胞系細(xì)胞經(jīng)ATRA誘導(dǎo)分化后，細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變：S期細(xì)胞所占比例逐漸降低，G0／G1期細(xì)胞所占比例逐漸增加：端粒酶活性被明顯抑制，與對(duì)照組比較，ATRA處理后l、3、5、7天端粒酶活性抑制率分別為109％、3