前列環(huán)素在慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中的表達(dá)及其在香煙提取物誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 研究前列環(huán)素（PGI2）在慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中的表達(dá)變化情況以及其對(duì)香煙提取物（CSE）誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 方法: 1.分別采集COPD患者（12例）和非COPD對(duì)照患者（10例）的肺組織標(biāo)本，利用HE染色評(píng)估肺部病理改變。采用缺口末端標(biāo)記法定量肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PGI2-S蛋白在肺內(nèi)細(xì)胞的表達(dá)分布以及酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)量肺組織勻漿上清中6-酮-前列腺素1a（PG

2、I2穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物）的含量變化。2.體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）：①分別以不同濃度的CSE（0％、0.5％、1％、2.5％、5％、10％）干預(yù)HUVEC24h，采用分光光度法評(píng)估Caspase-3活化程度，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PGI2-S蛋白的表達(dá)以及酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)量細(xì)胞上清液中6-酮-前列腺素1a（PGI2穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物）的含量。②選用2.5％CSE分別干預(yù)HUVEC3、6、9、12、24、48h，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)不同時(shí)

3、間點(diǎn)細(xì)胞上清液中6-酮-前列腺素1a（6-keto Prostaglandin F1a）的含量。③用2.5％CSE與不同濃度的PGI2類似物-貝前列素（Beraprost Sodium BPS10-8M/L、10-7M/L、10-6M/L、10-5M/L）共同干預(yù)HUVEC24h，采用分光光度法評(píng)估Caspase-3活化程度以及缺口末端標(biāo)記法定量?jī)?nèi)皮細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果: 1.①COPD患者肺中型血管與微小型血管內(nèi)皮細(xì)胞

4、凋亡指數(shù)較非COPD對(duì)照組患者[（6.1±1.2）％和（5.9±0.4）％]明顯增高。PGI2-S蛋白在對(duì)照組肺中型血管和微小型血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)分別（95.4±2.1）％和（82.3±7.4）％，在氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)為（95.5±2.2）％。當(dāng)COPD發(fā)生后，PGI2-S蛋白在肺中型血管和微小型血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)分別下降為（55.2±9.8）％和（42.3±5.1）％，而氣道上皮的表達(dá)下降更是顯著[（31.8±5.2）％]。CO

5、PD患者每毫升肺組織勻漿上清中6-酮-前列腺素1a（6-keto Prostaglandin F1a）含量（2.6±0.4）ng/ml要遠(yuǎn)低于非COPD對(duì)照組（16.2±2.8）ng/ml。2.①當(dāng)CSE干預(yù)濃度低于2.5％時(shí)，Caspase-3活性隨干預(yù)濃度增加呈遞增趨勢(shì)，分別為（226.54±6.56）％、（235.06±16.25）％和（253.94±20.74）％，但遞增差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)干預(yù)濃度超過(guò)2.5％時(shí)，Caspa

6、se-3活性陡然下降至（84.67±7.84）％，且與2.5％CSE干預(yù)條件下的活化程度相比，差異有顯著性。PGI2-S蛋白表達(dá)以及6-keto Prostaglandin F1a的釋放隨著CSE干預(yù)濃度不斷升高逐漸下降，在10％CSE干預(yù)條件下兩者均降至最低，分別為（0.10±0.06）ng/ml和（0.40±0.04）ng/ml。②用2.5％ CSE干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞3h后，其分泌6-keto Prostaglandin F1a量即開(kāi)始下

7、降，至9h達(dá)最低峰，隨后有小幅度回升，待干預(yù)48h后回升幅度有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③BPS可有效地降低CSE引起的Caspase-3活化以及內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，但量效關(guān)系不太明顯。 結(jié)論: 1.①COPD患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞存在異常凋亡現(xiàn)象。②PGI2-S蛋白表達(dá)亦下降，其中氣道上皮細(xì)胞部位下降最為明顯，中型血管內(nèi)皮細(xì)胞次之。③COPD患者肺組織中PGI2的生成明顯減少。2.香煙提取物可引起內(nèi)皮細(xì)胞功能受損，而PGI2對(duì)受損凋亡的