前列環(huán)素在慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中的表達及其在香煙提取物誘導的內皮細胞凋亡中的保護作用.pdf

1、目的: 研究前列環(huán)素（PGI2）在慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中的表達變化情況以及其對香煙提取物（CSE）誘導的內皮細胞凋亡的保護作用。 方法: 1.分別采集COPD患者（12例）和非COPD對照患者（10例）的肺組織標本，利用HE染色評估肺部病理改變。采用缺口末端標記法定量肺血管內皮細胞凋亡情況，免疫組織化學法檢測PGI2-S蛋白在肺內細胞的表達分布以及酶聯免疫吸附法測量肺組織勻漿上清中6-酮-前列腺素1a（PG

2、I2穩(wěn)定的代謝產物）的含量變化。2.體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）：①分別以不同濃度的CSE（0％、0.5％、1％、2.5％、5％、10％）干預HUVEC24h，采用分光光度法評估Caspase-3活化程度，免疫組織化學法檢測PGI2-S蛋白的表達以及酶聯免疫吸附法測量細胞上清液中6-酮-前列腺素1a（PGI2穩(wěn)定的代謝產物）的含量。②選用2.5％CSE分別干預HUVEC3、6、9、12、24、48h，用酶聯免疫吸附法檢測不同時

3、間點細胞上清液中6-酮-前列腺素1a（6-keto Prostaglandin F1a）的含量。③用2.5％CSE與不同濃度的PGI2類似物-貝前列素（Beraprost Sodium BPS10-8M/L、10-7M/L、10-6M/L、10-5M/L）共同干預HUVEC24h，采用分光光度法評估Caspase-3活化程度以及缺口末端標記法定量內皮細胞凋亡情況。 結果: 1.①COPD患者肺中型血管與微小型血管內皮細胞

4、凋亡指數較非COPD對照組患者[（6.1±1.2）％和（5.9±0.4）％]明顯增高。PGI2-S蛋白在對照組肺中型血管和微小型血管內皮細胞中的表達分別（95.4±2.1）％和（82.3±7.4）％，在氣道上皮細胞中的表達為（95.5±2.2）％。當COPD發(fā)生后，PGI2-S蛋白在肺中型血管和微小型血管內皮細胞中的表達分別下降為（55.2±9.8）％和（42.3±5.1）％，而氣道上皮的表達下降更是顯著[（31.8±5.2）％]。CO

5、PD患者每毫升肺組織勻漿上清中6-酮-前列腺素1a（6-keto Prostaglandin F1a）含量（2.6±0.4）ng/ml要遠低于非COPD對照組（16.2±2.8）ng/ml。2.①當CSE干預濃度低于2.5％時，Caspase-3活性隨干預濃度增加呈遞增趨勢，分別為（226.54±6.56）％、（235.06±16.25）％和（253.94±20.74）％，但遞增差異無明顯統(tǒng)計學意義。當干預濃度超過2.5％時，Caspa

6、se-3活性陡然下降至（84.67±7.84）％，且與2.5％CSE干預條件下的活化程度相比，差異有顯著性。PGI2-S蛋白表達以及6-keto Prostaglandin F1a的釋放隨著CSE干預濃度不斷升高逐漸下降，在10％CSE干預條件下兩者均降至最低，分別為（0.10±0.06）ng/ml和（0.40±0.04）ng/ml。②用2.5％ CSE干預內皮細胞3h后，其分泌6-keto Prostaglandin F1a量即開始下

7、降，至9h達最低峰，隨后有小幅度回升，待干預48h后回升幅度有明顯統(tǒng)計學意義。③BPS可有效地降低CSE引起的Caspase-3活化以及內皮細胞的凋亡，但量效關系不太明顯。 結論: 1.①COPD患者肺血管內皮細胞存在異常凋亡現象。②PGI2-S蛋白表達亦下降，其中氣道上皮細胞部位下降最為明顯，中型血管內皮細胞次之。③COPD患者肺組織中PGI2的生成明顯減少。2.香煙提取物可引起內皮細胞功能受損，而PGI2對受損凋亡的