NF-кB在COPD肺血管內皮細胞中的表達及其在香煙提取物誘導內皮細胞凋亡中的作用.pdf

1、本文對NF-кB在COPD肺血管內皮細胞中的表達及其在香煙提取物誘導內皮細胞凋亡中的作用進行了研究，本研究分為三個部分：
　　 第一章：COPD患者肺血管內皮細胞凋亡和NF-κB的表達情況。
　　 目的：觀察慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺血管內皮細胞凋亡、核因子κ B(NF-κ B)表達變化情況。
　　 方法：收集湘雅二醫(yī)院胸外科20

2、08年6月至2008年10月因肺癌、肺大皰入院行肺葉切除術的患者19例，根據(jù)COPD診斷標準和WHO吸煙調查方法標準，將其分為三組：A組：非吸煙非COPD者(6例)；B組：吸煙非COPD者（6例）；C組：吸煙并COPD患者（穩(wěn)定期，7例）。利用HE染色評估肺部病理改變，采用缺口末端標記法檢測肺血管內皮細胞凋亡情況，免疫組織化學法檢測NF-κB p65蛋白在肺血管內皮細胞的表達。
　　 結果：A、B、C三組肺血管內皮細胞凋亡率依次

3、增高，分別為(4.84±0.45)％、(8.80±0.63)％、(11.87±0.79)％，任意兩組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。A組、B組、C組患者肺血管內皮細胞NF-KBp65表達率分別為(3.72±0.33)％、(15.92±1.13)％、(37.23±4.75)％，三組間依次增高，各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：⑴吸煙并COPD患者及吸煙非COPD者肺血管內皮細胞凋亡增加。⑵吸煙并

4、COPD患者及吸煙非COPD患者肺血管內皮細胞NF-κB表達增加。⑶吸煙可能與肺血管內皮細胞凋亡，NF-κB表達增加有關。
　　 第二章：COPD小鼠肺血管內皮細胞凋亡和NF-κB表達情況。
　　 目的：觀察COPD小鼠模型肺血管內皮細胞凋亡、核因子κB(NFκB)表達變化情況。
　　 方法：16只C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組（8只）和COPD組（8只），采用煙霧暴露法建立COPD模型，對肺組織切片以H

5、E染色評估肺部病理改變，采用缺口末端標記法定量肺血管內皮細胞凋亡情況，免疫組織化學法檢測NF-κ B蛋白在肺血管內皮細胞的表達情況。
　　 結果：COPD模型小鼠肺血管內皮細胞凋亡率為(15.91±1.15)％，較對照組[(3.39±0.64)％]增高，兩組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。COPD模型小鼠肺血管內皮細胞NF-κB p65表達率為(35.30±4.20)％，較對照組[(6.37±0.54)％]增高，兩組間

6、比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：⑴吸煙COPD模型組小鼠肺血管內皮細胞凋亡增加。⑵吸煙COPD模型組小鼠肺血管內皮細胞NF-κB表達增加。
　　 第三章：NF-κB在CSE誘導的內皮細胞凋亡中的作用。
　　 目的：研究NF-κB在香煙提取物(cigarette smoking extract，CSE)誘導的內皮細胞凋亡中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC），分

7、為以下三組，分別給予不同處理：1.不同濃度的CSE（0％、2.5％、5％、10％、20％）干預HUVEC12h；2.5％CSE干預HUVEC各0h、0.5h、2h、4h、8h、12h；3.用100μmol/LNF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）預處理HUVEC0.5h后，以5％CSE干預該細胞各1h、2h。以上各組采用免疫細胞化學法檢測NF-κBp65核轉位情況，用流式細胞術Annexin V/PI雙染法檢測內皮細胞凋亡率

8、。
　　 結果：⑴CSE濃度低于5％時，隨CSE濃度的增加，NF－κBp65核轉位率逐漸增加，5％CSE干預組核轉位率最高，為（18.13±1.37）％，當CSE濃度超過5％時，NF-κBp65核轉位率逐漸下降，且與5％CSE干預組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；隨CSE濃度的增加，HUVECs的凋亡率逐漸增加，10％CS組凋亡率最高，為(45.19±4.91)％，與其余干預組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。⑵5％CS

9、E干預HUVECO.5h時NF-κBp65核轉位率最高，為(93.80±3.12)％,和其他組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，隨干預時間增加，核轉位率迅速下降；5％CSE干預HUVEC2h以下，隨干預時間的延長，HUVEC的凋亡率逐漸增加，但無統(tǒng)計學意義。5％CSE干預HUVEC超過2h后，凋亡率明顯增加，且與2h組[(7.45±1.06)％]比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。⑶PDTC預處理細胞后，5％CSE誘導1h及2h后的NF-

10、κBp65核轉位率明顯下降，分別為(5.10±0.55)％、(4.51±0.85)％，與無預處理組[(31.93±2.94)％]、[(25.32±3.54)％]比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；以PDTC預處理HUVECs后，5％CSE誘導的細胞凋亡率明顯增高，1h與2h組凋亡率分別為(11.20±1.11)％、(38.83±3.43)％，與未預處理組[(6.53±0.80)％]、[(28.87±3.53)％]比較，差異有統(tǒng)計學意義(P