系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血NKT細胞的初步研究.pdf

1、第一部分：外周血Va24 Vβ11NKT細胞與SLE發(fā)病的關系 目的：檢測SLE患者外周血Va24 Vβ11NKT細胞的數量，探討其與SLE發(fā)病的關系。方法：運用流式細胞儀技術檢測SLE患者外周血單個核細胞（PBMC）中Va24Vβ11NKT細胞的百分比數量。隨機選擇仁濟醫(yī)院風濕科門診SLE患者10例，診斷均符合1997年美國風濕病協(xié)會（ARA）制定的SLE分類標準，患者為初發(fā)病例或穩(wěn)定后再復發(fā)患者,患者抽血時激素平均劑量為13

2、.5±10mg。正常人10例作對照。所有流式結果都由Cellquest軟件分析。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行數理統(tǒng)計。結果:健康對照組PBMC中NKT細胞的數量為0.20±0.06％,SLE患者為0.039±0.023％,與健康對照組相比，SLE患者PBMC中NKT細胞數量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義。結論：SLE患者外周血NKT細胞數量減少，提示NKT細胞可能參與了SLE的發(fā)病。 第二部分：SLE患者PBMC中CD1d分子

3、的表達 目的：探討CD1d分子在SLE患者與健康人PBMC中的表達情況是否存在差異。方法：運用流式細胞儀檢測SLE患者PBMC中CD1d分子的總體表達，然后運用四色熒光標記法檢測CD1d分子在單核細胞，B細胞及T細胞中的表達情況，所有結果用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行數理統(tǒng)計。結果：SLE患者組PBMC中CD1d分子的表達為11.7±4％，健康對照組CD1d的表達為6.9±2.4％。SLE患者PBMC 中CD1d 分子的總體表

4、達明顯增高，其差異有統(tǒng)計學意義。SLE患者CD1d分子主要表達在單核細胞上，部分表達在B細胞上，在T細胞上幾乎不表達。SLE患者組CD1d分子在單核細胞、B細胞、T細胞上的表達分別為73.81±20.9％、15.99±6.4％，0.39±0.26％，健康對照組則分別為37.3±23.11％, 34.8±14.70％, 5.35±7.40％。SLE患者在單核細胞上的表達明顯高于正常對照組，在B、T細胞上的表達則低于正常對照組，其差異均有統(tǒng)

5、計學意義。結論：CD1d分子在SLE患者PBMC中的總體表達較健康對照組增高，尤其是在單核細胞上的表達明顯高于正常對照組。提示SLE患者NKT細胞數量下降并非由CD1d分子表達缺陷所致。 第三部分α－Galcer刺激SLE患者PBMC后NKT細胞的增殖 目的：探討經脂類物質α－Galcer刺激PBMC后SLE患者NKT細胞的增殖情況。方法：無菌操作下取患者新鮮靜脈抗凝血8ml,用Ficoll/密度梯度法離心分離PBMC，

6、以1×106cells/ml懸于10％FBS-1640完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)。于第0天，加入α－GalCer 200ng/ml；于第4天補充α－GalCer 200ng/ml，IL-2 20U/ml，7天后觀察細胞狀態(tài)。將細胞轉移至流式細胞儀專用試管，加Vα24Vβ11單抗蔽光孵育30分鐘，洗去多余熒光后上機檢測Vα24Vβ11NKT細胞的表達。結果：經α－GalCer 刺激后，SLE患者（N=15）外周血Vα24Vβ11NKT細胞數為0.0

7、65±0.03％，與刺激前（0.039± 0.023％）相比較，差異無統(tǒng)計學意義。經α－GalCer 刺激后，正常對照組（N=15）Vα24Vβ11NKT細胞數為4.52±5.11％，與刺激前(0.20±0.06％)相比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義。刺激前與刺激后，SLE患者組NKT細胞的數量均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義。結論：經α－Galcer刺激后，SLE患者PBMC中NKT細胞無增殖，提示SLE患者NKT細胞的功能可能存在異常。