LMP-1在年輕恒牙和成熟恒牙的牙髓及牙乳頭中的表達.pdf

1、目的：
　　 在牙齒發(fā)育期間，牙乳頭間充質(zhì)細胞分化為成牙本質(zhì)細胞，形成原發(fā)性牙本質(zhì)；在牙齒萌出后，無論年輕恒牙，還是成熟恒牙，牙髓在受創(chuàng)傷和感染時，牙髓組織中的成牙本質(zhì)細胞和新分化的成牙本質(zhì)細胞樣細胞就會形成第三期牙本質(zhì)，表明牙髓組織具有較強的自我防御能力和自身修復(fù)潛能。關(guān)于成牙本質(zhì)細胞和成牙本質(zhì)細胞樣細胞的分化以及牙本質(zhì)形成的確切機制還不完全清楚，但目前認為一些生物分子如轉(zhuǎn)錄因子、信號分子、生長因子、細胞外基質(zhì)分子等參與調(diào)節(jié)牙

2、髓組織中的細胞增殖、分化和基質(zhì)合成。
　　 LIM礦化蛋白1（LIM mineralization protein-1，LMP-1）是LIM結(jié)構(gòu)域蛋白家族成員，是一種胞內(nèi)非分泌蛋白，它廣泛存在于各種組織中。LMP-1調(diào)控成骨細胞的分化和成熟以及骨的形成。近年來有文獻報道LMP-1在人健康成熟牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中的前期牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細胞、未礦化的修復(fù)性牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細胞樣細胞、血管內(nèi)皮細胞和牙髓成纖維細胞中均有表達；提示LMP-

3、1在牙髓細胞和成牙本質(zhì)細胞的分化，牙本質(zhì)基質(zhì)的礦化中起著重要作用。但目前有關(guān)LMP-1在年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中表達差異的研究未見報道。而對這一問題的深入研究和探討，將有助于我們進一步認識牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的發(fā)育、成熟以及年輕恒牙牙髓修復(fù)能力的生物學(xué)機制，并為臨床研究活髓保存治療技術(shù)提供新的思路。
　　 本實驗應(yīng)用RT-PCR和Western-blot技術(shù)，首次檢測并比較LMP-1在人年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織

4、中的表達，以探尋其在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體發(fā)育和成熟中的作用，為臨床探尋新的活髓保存治療方法提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
　　 材料和方法：
　　 收集48例因正畸或阻生拔除的健康無齲的牙齒，研究對象年齡為11～30歲，均無全身系統(tǒng)性疾病，近三個月未曾服用免疫制劑和抗菌藥物。牙齒拔除后立即將年輕恒牙的牙乳頭用鑷子分離，凍存；然后將牙齒縱向劈開，完整取出牙髓組織，凍存。成熟恒牙直接將牙齒縱向劈開，完整取出牙髓組織，凍存。
　　

5、 按恒牙牙根發(fā)育的八個階段，結(jié)合臨床和X光片檢查，將R2/3，R3/4的年輕恒牙的牙乳頭組織歸為第1組，共24例；將112/3，113/4的年輕恒牙的牙髓組織歸為第2組（根尖孔未閉合組，根尖孔呈喇叭口狀），共24例；將Ac的成熟恒牙的牙髓組織歸為第3組（根尖孔閉合組），共24例；（R2/3代表牙根形成2/3；R3/4代表牙根形成3/4；Ac代表根尖已封閉）。每組中有12例樣本用于RT-PCR檢測，另12例樣本用于Western-blo

6、t檢測。
　　 采用RT-PCR和Western-blot技術(shù)對LMP-1進行基因水平和蛋白水平的檢測，采用SPSS11.0軟件包，應(yīng)用單因素方差分析方法對圖像分析的結(jié)果（即灰度值）進行統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 無論是在mRNA水平還是在蛋白質(zhì)水平，LMP-1在年輕恒牙的牙乳頭組織、年輕恒牙的牙髓組織和成熟恒牙的牙髓組織中均有表達，但表達強度不同。LMP-1