犬乳恒牙替換期血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及意義.pdf

1、動(dòng)物牙齒及頜面部生長發(fā)育的重要階段包括乳恒牙替換，其中有乳牙根、牙槽骨的吸收，恒牙胚的發(fā)育和恒牙萌出等一系列復(fù)雜的生理過程。乳恒牙替換是兒童口腔中的正常生理現(xiàn)象，其中萌出通道的形成，牙槽骨的改建以及乳牙根的吸收，是牙齒正常萌出和替換的先決條件，在這些過程中破骨細(xì)胞(OC)起著重要作用，它不僅參與吸收乳牙根、牙槽骨等組織，還為恒牙胚的發(fā)育和萌出開辟道路。但其機(jī)制至今不明，因此研究破骨細(xì)胞的激活、分化、成熟及表達(dá)等生物學(xué)特性對(duì)了解和調(diào)控乳恒

2、牙的萌出有重要意義。 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是由血小板、巨核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成骨細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞合成和分泌的多功能細(xì)胞素，是一種由亞基內(nèi)及亞基間二硫鍵交聯(lián)形成的同源二聚體糖蛋白。VEGF是一類高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管生成、增加血管通透性以及血管維持等功能。VEGF既是主要的血管形成因子，又是骨生長因子，與骨代謝關(guān)系密切。VEGF能明顯提高大鼠成骨細(xì)胞活性、增強(qiáng)其遷移、增殖、分化并加速其骨形

3、成。VEGF可促進(jìn)破骨細(xì)胞分化，維持骨髓功能，且達(dá)到類似于巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）的作用。許多研究表明，VEGF在骨代謝過程中協(xié)調(diào)著骨細(xì)胞的消長、細(xì)胞外基質(zhì)的改建、血管增生及骨形成、骨吸收間的關(guān)系。本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組織化學(xué)、原位雜交、圖像分析等方法，觀察了體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞中VEGF表達(dá)情況，以及犬乳恒牙替換過程中乳牙牙根穩(wěn)定期、乳牙根吸收期、恒牙列期三個(gè)階段的乳牙牙根、牙槽骨中的破牙細(xì)胞、破骨細(xì)胞和恒牙胚的成釉細(xì)胞

4、、成牙本質(zhì)細(xì)胞中VEGF的表達(dá)情況。初步探討VEGF在乳恒牙替換期和體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞中所起的作用。 主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 第一部分犬乳恒牙替換期VEGF 表達(dá)的研究分別采用免疫組化和原位雜交方法，觀察犬乳牙根穩(wěn)定期、乳牙根吸收期和恒牙列期中VEGF 的表達(dá)染色情況。 1.犬乳牙牙根穩(wěn)定期：犬乳牙牙根尚未發(fā)生生理性根吸收，乳牙根周圍牙槽骨未見吸收陷窩。恒牙胚處于牙冠發(fā)育階段，恒牙胚牙本質(zhì)、牙釉質(zhì)基質(zhì)開始形成。此

5、時(shí)VEGF 在牙槽骨的破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞免疫組化及原位雜交染色陽性，提示VEGF 可能參與破骨細(xì)胞的分化、成熟，參與犬乳牙牙根穩(wěn)定期的骨質(zhì)改建。恒牙胚的成釉細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞VEGF 免疫組化及原位雜交染色也為陽性，推測(cè)VEGF 可能參與恒牙胚的發(fā)育過程。 2.犬乳牙牙根吸收期：犬乳牙牙根發(fā)生生理性吸收，乳牙根面可見多數(shù)吸收陷窩，呈蠶食狀，陷窩中可見多核破牙細(xì)胞。牙囊周圍及接近牙胚的牙槽骨陷窩可見多核破骨細(xì)胞。恒牙胚冠部牙本質(zhì)、

6、牙釉質(zhì)進(jìn)一步形成和礦化。 此時(shí)可見VEGF 在乳牙根吸收面的破牙細(xì)胞、牙槽骨中的破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、恒牙胚的成釉細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞免疫組化染色陽性，其中破骨細(xì)胞染色為強(qiáng)陽性，提示此期VEGF 蛋白表達(dá)增強(qiáng)，以促進(jìn)牙槽骨和乳牙根的吸收。 破骨/破牙細(xì)胞原位雜交結(jié)果為強(qiáng)陽性，成骨細(xì)胞、恒牙胚的成釉細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞原位雜交結(jié)果陽性，提示此期破骨細(xì)胞分泌、合成VEGF 功能增強(qiáng)。 3.犬恒牙列期：乳牙脫落，恒牙萌出。牙

7、槽骨破骨細(xì)胞免疫組化及原位雜交染色弱陽性，染色灰度值均顯著增加，提示破骨細(xì)胞VEGF 分泌量明顯減少，牙槽骨處于骨質(zhì)改建較弱的時(shí)期。 第二部分體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞VEGF 表達(dá)的研究分別采用免疫組化和原位雜交方法，觀察體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞VEGF表達(dá)的情況。 實(shí)驗(yàn)取大鼠長骨骨髓，采用骨髓誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，培養(yǎng)體系中加入1,25(OH)2D3、IL-1β誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察破骨細(xì)胞形成情況。細(xì)胞培養(yǎng)6