持續(xù)性炎癥誘發(fā)脂代謝紊亂與三七總皂苷及其活性代謝單體的作用研究.pdf

1、脂代謝的任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均可出現(xiàn)脂代謝紊亂，表現(xiàn)為血脂各成分水平的異常改變和組織中脂質(zhì)的異常沉積。大量流行病學(xué)調(diào)查顯示，脂代謝紊亂與多種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病密切相關(guān)，包括腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等。既往觀點(diǎn)認(rèn)為，遺傳性因素是脂代謝紊亂最重要的發(fā)病原因，其次是飲食習(xí)慣等后天因素。 本室研究結(jié)果提示，持續(xù)性炎癥可導(dǎo)致脂代謝異常，全基因組基因芯片檢測結(jié)果也進(jìn)一步印證了這一觀點(diǎn)。同時(shí)，近年來國外大規(guī)模人群流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示系統(tǒng)性

2、紅斑狼瘡和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥疾病患者出現(xiàn)了明顯的血脂代謝紊亂，進(jìn)一步說明持續(xù)性炎癥刺激極可能是發(fā)生脂代謝紊亂的新的重要因素。目前國內(nèi)外在此方面的研究也鮮有報(bào)道，特別是基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究尚未見報(bào)道。另外，脂質(zhì)的異常沉積，尤其是脂質(zhì)在動(dòng)脈壁下的沉積，即動(dòng)脈粥樣硬化的形成，對健康的危害巨大。而巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞形成是動(dòng)脈壁下的脂質(zhì)沉積最重要的啟動(dòng)因素，為此，本研究采用體外培養(yǎng)泡沫細(xì)胞為模型，觀察炎癥刺激對泡沫細(xì)胞形成的影響。 三七總皂

3、苷(PNS)是三七中主要的活性成分，既往研究表明，PNS具有保護(hù)心肌、降低動(dòng)脈血壓、改善脂代謝紊亂及顯著的抗炎能力。IH901是PNS在利用模擬生物體腸道微生態(tài)環(huán)境中反應(yīng)得到的活性代謝單體。本研究通過在體實(shí)驗(yàn)觀察了PNS作用，并在離體實(shí)驗(yàn)中觀察了IH901的作用。 方法： 為觀察持續(xù)性炎癥刺激對高脂飲食大鼠血脂代謝情況的影響，將動(dòng)物分為高脂飲食、疊加炎癥、PDTC和PNS組。所有動(dòng)物均給予高脂飲食，疊加炎癥組動(dòng)物腹腔注射

4、酵母多糖-石蠟混懸液(20mg/kg，i.p.，5天1次)，PDTC和PNS組動(dòng)物除按疊加炎癥組處理外，分別每天給予PDTC(100mg/kg，i.p.)和PNS(120mg/kg，i.g.)。 為探討持續(xù)性炎癥刺激對大鼠血脂代謝影響的原因，將動(dòng)物分為正常對照、單純炎癥、PDTC治療和PNS治療組。所有動(dòng)物均給予正常飲食，單純炎癥組動(dòng)物腹腔注射酵母多糖-石蠟混懸液(20mg/kg，i.p.，5天1次)，PDTC治療和PNS治療組

5、動(dòng)物除按單純炎癥組處理外，分別每天給予PDTC(100mg/kg，i.p.)和PNS(120mg/kg，i.g.)。 為研究炎癥刺激對泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的影響，將培養(yǎng)的泡沫細(xì)胞分為泡沫細(xì)胞、炎癥刺激、PDTC和IH901組。炎癥刺激組給予LPS(20mg/L)進(jìn)行刺激，在炎癥刺激的基礎(chǔ)上，PDTC和IH901組分別給予相應(yīng)的試劑(PDTC25μM；IH90125μM)。 TNF-α采用ELISA法測定；TG、LDL、HD

6、L、TC、CE、LPL活性使用相應(yīng)的試劑盒測量；LPL、HMG-CoA還原酶、PPARα、PPARγ、CD36、ABCA1、Perilipin和LXRmRNA水平用RT-PCR法檢測，LPL、perilipin和NF-κB蛋白表達(dá)水平用westernblotting法測量，泡沫細(xì)胞染色采用油紅O。 結(jié)果： 1.持續(xù)性炎癥能夠明顯加重高脂飲食動(dòng)物的血脂代謝紊亂情況。疊加炎癥組動(dòng)物血清中TC、TG和LDL較高脂飲食組有明顯升

7、高，而HDL水平明顯下降，其變化與動(dòng)物體內(nèi)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度(TNF-α水平)呈平行性變化。持續(xù)性炎癥能誘發(fā)正常飲食動(dòng)物血脂紊亂，使TC、TG、LDL升高，HDL降低，與動(dòng)物體內(nèi)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度變化平行。 2.持續(xù)性炎癥刺激能減少LPL的表達(dá)(mRNA和蛋白水平)、降低了LPL的活性，同時(shí)增加了HMG-CoA還原酶mRNA的表達(dá)，并降低了PPARα/γ的表達(dá)。 3.同給予持續(xù)性炎癥刺激動(dòng)物相比，PDTC能夠顯著降低動(dòng)物血清中的TN

8、F-α水平，提高LPL的活性，增高LPL的表達(dá)(mRNA和蛋白水平)，降低HMG-CoA還原酶mRNA的表達(dá)，增高PPARα/γ的表達(dá)。 4.PNS能夠降低TNF-α、TC、TG、LDL水平，升高HDL水平，增加LPL的表達(dá)、提高LPL的活性，同時(shí)降低HMG-CoA還原酶的表達(dá)，并增高PPARα/γ的表達(dá)。 5.炎癥刺激使泡沫細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積顯著升高(TC、CE和CE/TC水平均升高)，與炎癥反應(yīng)強(qiáng)度(TNF-α水平)變

9、化平行。 6.炎癥刺激導(dǎo)致perilipin表達(dá)升高(mRNA和蛋白水平)及CD36、ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達(dá)降低。 7.PDTC能夠降低炎癥刺激導(dǎo)致的脂質(zhì)沉積增加，使CD36、ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達(dá)增高，perilipin表達(dá)降低(mRNA和蛋白水平)。 8.IH901能夠顯著降低炎癥刺激導(dǎo)致的泡沫細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積增加，使ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達(dá)增高，CD

10、36mRNA、perilipin(mRNA和蛋白)表達(dá)降低。 結(jié)論： 1.持續(xù)性炎癥刺激可以通過降低LPL和增高HMG-CoA還原酶表達(dá)以誘發(fā)/加重大鼠的脂代謝紊亂，其機(jī)制與持續(xù)性炎癥刺激對PPARα/γ的影響相關(guān)。 2.炎癥刺激可以引起體外培養(yǎng)的泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增加，其機(jī)制與炎癥刺激導(dǎo)致perilipin表達(dá)增高和ABCA1表達(dá)降低有關(guān)。 3.三七總皂苷口服能夠明顯減輕炎癥刺激誘發(fā)/加重的大鼠脂代謝紊