三七總皂苷抑制Hela細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)不同濃度三七總皂苷(Panax notognseng,PNS)作用于宮頸癌Hela細(xì)胞不同時(shí)相細(xì)胞增殖情況、mTOR介導(dǎo)的蛋白質(zhì)翻譯信號(hào)通路中4E-BP1、S6K1、mTOR蛋白的表達(dá)情況及其下游效應(yīng)分子VEGF蛋白的含量,探討三七總皂苷(PanaxnOtoginseng saponins,PNS)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響及其可能的分子機(jī)制,為PNS對(duì)宮頸癌治療的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用MTT

2、法檢測(cè)不同濃度(50、100、200、400μ g/mL)的PNS作用于Hela細(xì)胞不同時(shí)相(24h、48h、72h)后的增殖抑制率;熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)PNS作用Hela細(xì)胞24h后細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因(Luciferase,LUC)的表達(dá);應(yīng)用Western-Blot技術(shù)檢測(cè)200μ g/mL PNS作用于Hela細(xì)胞前后4E-BP1、S6K1、mTOR蛋白及其磷酸化水平的變化;應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)PNS作用于Hela細(xì)

3、胞24h前后細(xì)胞中VEGF蛋白的含量。
　　 結(jié)果：(1)MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),三七總皂苷對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)增殖具有明顯的抑制作用(P均<0.05),且呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性,在相同濃度的三七總皂苷作用下,隨作用時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng),差別有顯著性(P均<0.05);在同一時(shí)間下,三七總皂苷的濃度越高,對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng),差別有顯著性(P均<0.05)。(2)熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示三七總

4、皂苷作用后Hela細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因LUC的含量明顯低于對(duì)照組,差別有顯著性(P<0.05),并且隨著PNS濃度增加,Hela細(xì)胞中相對(duì)光單位值(RLU)越來(lái)越低,差異有顯著性意義(P均<0.05)。(3)Western-Blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),200μ g/mL的三七總皂苷作用于Hela細(xì)胞最初的2h內(nèi),p-S6K1和P-4E-BP1、P-mTOR蛋白表達(dá)均減少,而作用于Hela細(xì)胞24h后,細(xì)胞中總蛋白S6K1、4E-BP1和mT

5、OR的表達(dá)也明顯降低,差別有顯著性(P均<0.05)。(4)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PNS作用于Hela細(xì)胞24h后其VEGF蛋白含量明顯下降,差別有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：三七總皂苷對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞體外生長(zhǎng)具有明顯抑制作用,其機(jī)制可能是三七總皂苷通過(guò)阻斷細(xì)胞的mTOR信號(hào)通路,從而抑制了mRNA翻譯效率,影響細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)量,同時(shí)三七皂苷可能還可抑制翻譯起始復(fù)合物eIF4F的形成,下調(diào)腫瘤促血管生長(zhǎng)因子V