三七總皂苷對藥物代謝酶的影響.pdf

1、目的：
　　1、研究三七總皂苷對小鼠肝臟谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的抑制作用及其動力學(xué)分析。
　　2、研究三七總皂苷對大鼠肝組織內(nèi)藥物代謝酶CYP3A的抑制作用及其動力學(xué)分析。
　　3、研究三七總皂苷對大鼠血清及肝組織內(nèi)抗氧化酶活性的影響。
　　4、研究三七總皂苷對大鼠肝組織內(nèi)細(xì)胞色素P450和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶活性的影響。
　　方法：
　　1、采用差速離心法制備小鼠胞質(zhì)液

2、酶，用半數(shù)效量概率單位法及Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法求得小鼠肝臟GST的米氏常數(shù)（Km）、最大反應(yīng)速度（Vmax）和三七總皂苷對小鼠肝臟 GST的半數(shù)抑制濃度（IC50）以及判斷三七總皂苷對GST的抑制類型和抑制常數(shù)（Ki、Kis）。
　　2、采用差速離心法制備大鼠微粒體酶，用半數(shù)效量概率單位法及Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法求得大鼠肝臟CYP3A的米氏常數(shù)（Km）、最大反應(yīng)速度（Vmax）和三七總皂苷

3、對大鼠肝臟 CYP3A的半數(shù)抑制濃度（IC50）以及判斷三七總皂苷對CYP3A的抑制類型和抑制常數(shù)（Ki）。
　　3、將大鼠鼠隨機(jī)分成四組，每組8只。大鼠按100 mg?kg-1、200 mg?kg-1、400 mg?kg-1分別灌胃給予三七總皂苷，空白組給等體積蒸餾水連續(xù)給藥38天。全部大鼠末次給藥后24h股動脈取血，分離血清，測定抗氧化酶活性及自由基濃度；取肝臟勻漿，4000r?min-1低溫離心，取一部分上清液測定一系列抗氧

4、化酶活性及自由基濃度。
　　4、將大鼠鼠隨機(jī)分成六組，每組8只。大鼠按100 mg?kg-1、200 mg?kg-1、400 mg?kg-1分別灌胃給予三七總皂苷，空白組給等體積蒸餾水連續(xù)給藥38天，苯巴比妥組與地塞米松組第36天按80 mg?kg-1腹腔注射，連續(xù)3天。分離肝臟，用差速離心法制備肝臟微粒體及胞漿液，采用雙光束紫外分光光度法測定細(xì)胞色素b5的含量，一相代謝酶NADPH-細(xì)胞色素C還原酶、CYP3A、CYP2E1和二

5、相代謝酶GST、UGT的活性。
　　結(jié)果：
　　1、三七總皂苷對小鼠肝臟GST有抑制作用，其 IC50是189.54mg?L-1；對底物還原型谷胱甘肽（GSH），GST的Km是0.4563 mmol?L-1，Vmax是476.19U?mg-1；對底物1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB），GST的Km是0.1097 mmol?L-1，Vmax是400.00U?mg-1。對底物GSH，三七總皂苷對小鼠肝臟GST屬于混合性抑制，其

6、抑制常數(shù)Ki是0.27g?L-1，Kis是0.68g?L-1；對底物CDNB，三七總皂苷對小鼠肝臟GST屬于混合性抑制，其抑制常數(shù)Ki是0.21g?L-1，Kis是0.66g?L-1。
　　2、三七總皂苷對大鼠肝組織CYP3A有抑制作用，其IC50是689.54mg?L-1；對底物氨基比林，CYP3A的Km是0.036 mmol?L-1，Vmax是21.01nmol?min-1?mg-1；三七總皂苷對大鼠肝組織CYP3A屬于混合性

7、抑制，其抑制常數(shù)Ki是247.79mg?L-1，Kis是321.79mg?L-1。
　　3、在大鼠血清中，PNS400mg?kg-1組與空白組比較能升高Cr含量（p<0.05），PNS400mg?kg-1組與空白組比較能降低 SOD活性(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組、PNS100mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 GSH-PX活性（p<0.01），能降低NO含量（p<0.05）；PNS200mg?kg-1組與空

8、白組比較能顯著降低 NO含量（p<0.01）。在大鼠肝組織中，PNS400mg?kg-1組、PNS100mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 NOS活性（p<0.01）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能降低 MDA含量(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 NO含量(p<0.01）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能顯著升高GST活性（p<0.05）。
　　4、PNS400mg?k

9、g-1組與空白組比較能升高 GST的活性(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組、PNS200mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低UGT活性(p<0.01）；苯巴比妥鈉組與空白組比較，顯著誘導(dǎo) CYP3A的活性（p<0.05）；非常顯著誘導(dǎo)GST、UGT的活性（p<0.01），但對NADPH-細(xì)胞色素C還原酶沒有影響；地塞米松組與空白組比較，顯著誘導(dǎo)UGT的活性（p<0.05）；非常顯著性誘導(dǎo)NADPH-細(xì)胞色素C還原酶、CYP

10、3A的活性（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、三七總皂苷對小鼠肝臟GST的活性有明顯抑制作用。
　　2、三七總皂苷對大鼠肝臟CYP3A的活性有明顯抑制作用。
　　3、PNS400mg?kg-1組能升高血清 Cr含量，說明在大劑量使用三七時可能對腎臟有損害；三七總皂苷對大鼠肝組織里一系列抗氧化酶的活性和自由基的含量影響很小。
　　4、三七總皂苷對細(xì)胞色素 P450沒有影響，PNS400mg?kg-1組能升