六味地黃方及其配伍對(duì)血小板功能的影響.pdf

1、血小板(platelet)是血液中運(yùn)行著的微小顆粒成分之一，在止血、血栓形成、炎癥反應(yīng)、腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移及器官移植后的排異反應(yīng)中起重要作用。臨床應(yīng)用六味地黃方(LWDHF)治療與預(yù)防的許多疾病中，如腎病、免疫性疾病、高血壓、糖尿病及并發(fā)的血管病變、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤等，血小板功能(粘附、聚集與釋放)的異常是其共有的病理表現(xiàn)之一。本文依據(jù)該方的配伍規(guī)律，觀察了全方(熟地：山茱萸：山藥：澤瀉：丹皮：茯苓為8：4：4：3：3：3組成)及其配伍“

2、三補(bǔ)”方(熟地：山茱萸：山藥為8：4：4)、“三瀉”方(澤瀉：丹皮：茯苓為3：3：3)、熟地/澤瀉“藥對(duì)”(8：3)、山茱萸/丹皮“藥對(duì)”(4：3)及山藥/茯苓“藥對(duì)”(4：3)對(duì)肺動(dòng)脈血栓形成模型小鼠致栓后恢復(fù)時(shí)間與血小板損失率的影響，及對(duì)模型大鼠、正常家兔血小板粘附功能、聚集功能、5-羥色胺(5-HT)的釋放功能及血小板[Ca2]i的影響；并考察該方的配伍關(guān)系。
　　 1.六味地黃方及其配伍對(duì)小鼠肺動(dòng)脈血栓形成的影響：通過(guò)復(fù)

3、制小鼠肺動(dòng)脈血栓栓塞模型，觀察六味地黃方全方及其配伍“三補(bǔ)”方、“三瀉”方、熟地/澤瀉、山茱萸/丹皮及山藥/茯苓灌胃給藥，對(duì)小鼠體內(nèi)血栓形成后恢復(fù)時(shí)間及血小板損失率的影響。結(jié)果表明，全方27.0g生藥kg-1、“三補(bǔ)”方17.28g生藥-kg-1、“三瀉”方9.72 g生藥·kg-1、熟地/澤瀉11.88 g生藥-kg-1、山茱萸/丹皮7.56g生藥·kg-1均能明顯縮短小鼠肺栓塞后的恢復(fù)時(shí)間，降低致栓后血小板損失率；山藥/茯苓在7.5

4、6g生藥·kg-1時(shí)，無(wú)明顯影響。提示該方具有抗體內(nèi)血栓形成的作用，抗栓作用與降低血小板損失率正相關(guān)。依據(jù)作用的強(qiáng)弱順序?yàn)槿?“三補(bǔ)*方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三瀉”方>山藥/茯苓，提示該方起主要作用的配伍是山茱萸/丹皮、熟地/澤瀉。
　　 2.六味地黃方及其配伍對(duì)血小板粘附功能的影響：鑒于本方是治療陰虛證的代表方劑，根據(jù)陰虛可以致血瘀的觀點(diǎn)。以氫化可的松及腎上腺素復(fù)制陰虛血瘀證大鼠模型。全方(13.50 g·kg-1)

5、、“三補(bǔ)”方(8.64 g·kg-1)、“三瀉”方(4.86g·kg-1)、熟地/澤瀉(5.94 g·kg-1)及山茱萸/丹皮(3.78 g·kg-1)灌胃給藥時(shí)，均能明顯降低模型大鼠的血小板粘附率，提示該方有抑制血小板的粘附的作用。按其降低血小板粘附率作用的強(qiáng)弱排列順序?yàn)椋喝?“三補(bǔ)”方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三瀉”方；該方抑制血小板粘附的作用以山茱萸/丹皮與熟地/澤瀉貢獻(xiàn)較大。
　　 3.六味地黃方及其配伍對(duì)血小板聚

6、集功能的影響：通過(guò)對(duì)正常家兔體外給藥與陰虛血瘀證模型大鼠灌胃給藥對(duì)不同誘導(dǎo)劑引起的血小板聚集率考察，結(jié)果表明：全方及其配伍均能不同程度降低血小板活化因子(PAF)、花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率，并存在明顯的量效關(guān)系；根據(jù)IC50判斷，由PAF、從、ADP誘導(dǎo)的IC50由大至小的排列順序分別為：山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>“三補(bǔ)”方>熟地/澤瀉>山茱萸/丹皮(PAF)；山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>熟地

7、/澤瀉>“三補(bǔ)”方>山茱萸/丹皮(AA)；山藥/茯苓>“三瀉”方>全方>熟地/澤瀉>“三補(bǔ)”方>山茱萸/丹皮(ADP)。提示在相同劑量時(shí)，山藥/茯苓對(duì)血小板聚集的抑制作用最弱，山茱萸/丹皮的作用最強(qiáng)。
　　 陰虛血瘀證模型大鼠灌胃給藥，造模方法與給藥劑量如前所述。結(jié)果表明：全方及其配伍均能明顯降低模型大鼠的血小板最大聚集率；按作用的強(qiáng)弱趨勢(shì)排序：全方>山茱萸/丹皮>熟地/澤瀉>“三補(bǔ)”方>“三瀉”方。提示該方有抑制血小板聚集的作

8、用，其配伍山茱萸/丹皮、熟地/澤瀉起主要作用。
　　 4.六味地黃方及其配伍對(duì)血小板5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)釋放功能的影響：血小板激活后釋放顆粒內(nèi)的活性物質(zhì)，進(jìn)一步招募與激活血小板。通過(guò)定量檢測(cè)5-HT含量，觀察六味地黃方及其配伍體外給藥對(duì)ADP激發(fā)的家兔血小板5-HT釋放的影響。結(jié)果表明，在終濃度為18.52mg生藥·ml-1時(shí)，全方及其配伍均能明顯降低5-HT釋放率。全方及其配伍的血小板

9、5-HT釋放率由低到高的順序?yàn)椋荷杰镙?丹皮<“三補(bǔ)”方<熟地/澤瀉<全方<“三瀉”方<山藥/茯苓。提示該方具有抑制血小板釋放的作用；該方抑制血小板釋放作用的趨勢(shì)是山茱萸/丹皮最強(qiáng)，山藥/茯苓最弱。
　　 5.六味地黃方及其配伍對(duì)血小板[Ca2+]i的影響：Ca2+是血小板活化的信使物質(zhì)。通過(guò)體外給藥(終濃度為9.26 mg生藥·ml-1)，以Fluo-3AM為Ca2+熒光探針，ADP為血小板激活劑，檢測(cè)該方及其配伍對(duì)家兔血小板