腫瘤翻譯調(diào)控蛋白(TCTP)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索姓名：馬強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：李明20090410中文摘要安全性沒有很好解決，如對(duì)導(dǎo)入基因的控制、外緣基因及基因載體本身整合到宿主染色體帶來的一系列問題等；②用于大腸癌理想載體的選擇應(yīng)具有安全性、高效性、靶向性、大容量性和可控性等特點(diǎn)，目前還難以找到可運(yùn)用到理想的臨床要求載體：③缺乏足夠的基因治療靶序列，

2、大腸癌的發(fā)生是一種多基因水平調(diào)控的失控所致單獨(dú)基因治療效果差。由此進(jìn)一步深入研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找確定更多更有效的治療靶基因，制備安全高效的基因治療載體是大腸癌基因治療中迫切需要解決的問題。本文第一部分著重研究腫瘤翻譯調(diào)控蛋白(TCTP)對(duì)高轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細(xì)胞株的細(xì)胞生物學(xué)影響以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究。第二部分著重研究新型基因治療用慢病毒載體生產(chǎn)體系的改進(jìn)和優(yōu)化。第一部分通過構(gòu)建靶向TCTP基因的shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，下調(diào)TCTP

3、在LoVo細(xì)胞中的表達(dá)。通過CCK一8實(shí)驗(yàn)檢測LoVo細(xì)胞的增殖速度，粘附實(shí)驗(yàn)檢測LoVo細(xì)胞對(duì)ECM的粘附能力，趨化實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測LoVo細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，侵襲實(shí)驗(yàn)檢澳lJLoVo細(xì)胞對(duì)于ECM的分解穿透能力，EMSA以及熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢i貝OTCTP下調(diào)后對(duì)于NFrB活性的影響。通過成瘤實(shí)驗(yàn)檢測TCTP下調(diào)對(duì)于LoVo細(xì)胞成瘤能力的影響，轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)檢測LoVo細(xì)胞體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移能力的影響，通過2D電泳和質(zhì)譜分析鑒定與TCTP相關(guān)蛋白，

4、并初步評(píng)價(jià)TCTP在正常人以及病人血清中的含量。構(gòu)建shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，質(zhì)粒酶切以及測序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。下調(diào)TCTP在LoVo細(xì)胞中的表達(dá)，經(jīng)熒光顯微鏡觀察各組LoVo細(xì)胞均出現(xiàn)綠色報(bào)告熒光，RT。PCR，westernblotting，qRTPCR分析鑒定TCTP的表達(dá)下調(diào)分別達(dá)至t]82％、89％、73％。TCTP下調(diào)能夠體外減慢LoVo細(xì)胞的增殖速度，shRNATCTP，shRNATCTPLoVoparental組分別鋪