Beclin1基因過表達對結腸癌細胞生物學特性的影響及其分子機制的初步研究.pdf

1、| f I l l lI I I II l lU I I l l l l lI f l l l 0Y 2 6 6 3 1 0 4中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論

2、文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名：王絲』砑 日期：型坐：羔：塑中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權使用授權書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產權的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產權單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論

3、文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容( 保密內容除外) ，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導教師簽名：日 期：型生：[ 翌·中文論著摘要·B e c l i n l 基因過表達對結腸癌細胞生物學特性的影響及其分子機制的初步研究目 的結腸癌是常見的惡性腫瘤之一，以4 0 歲～5 0 歲年齡組發(fā)病率最高，全球每年新發(fā)病例約8 0 0 萬人，占所有惡性腫瘤的1 0

4、 ％1 5 ％。結腸癌在我國的發(fā)病率有增高的趨勢，死亡率僅次子肺癌和肝癌，占我國惡性腫瘤第三位。B e c l i n l 基因也稱B E C N l 基因，是酵母A T G 6 的同系物，也是哺乳動物參與自噬的特異性基因。B e c l i n l 不僅參與自噬體的形成，還可通過調節(jié)自噬活性對腫瘤發(fā)生、發(fā)展起著重要作用。關于自噬基因B e c l i n l 與非小細胞肺癌，乳腺癌，宮頸癌等都有了相關的研究，但B e c l i n

5、l 與結腸癌在體內外關系的研究還很少。本研究旨在利用B e c l i n l 基因在結腸癌細胞H C T l 5 和H C T l l 6 細胞中過表達，對細胞的自噬、凋亡、侵襲、生長活性及相關基因表達進行檢測，以此來研究B e c l i n l 基因過表達對結腸癌細胞生物學特性的影響，初步探索自噬基因B e c l i n l 的在結腸癌中的分子機制。方法設計特異引物利用R T - P C R 方法從H C T l 5 細胞總R

6、N A 反轉錄B e c l i n l c D N A ，并連接到p U C m ．T 載體中，進行酶切鑒定及測序。將測序正確的p U C m ．B e c l i n l克隆D N A 及p c D N A 3 ．1 ／m y c ．h i s ( + ) 質粒D N A 擴增，分別進行E c o R I 、X b aI 雙酶切，純化B e c l i n l 和p c D N A 3 ．1 ／m y c —h i s ( + )

7、片段，連接，轉化，擴增，酶切鑒定及測序。將構建的B e c l i n l 質粒分別轉染H C T l 5 、H C T l l 6 細胞并進行G 4 1 8 篩選建立穩(wěn)定克隆細胞系，在D N A 水平進行鑒定，分別在R N A 水平和蛋白水平上對p c D N A 3 ．1 ／m y c —h i s —B e c l i n l 質粒進行表達檢測，篩選獲得B e c l i n l 高表達結腸癌陽性克隆細胞株，并進行相關實驗檢測，用