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1、第一部分:生長因子肽進行黑素細胞體外培養(yǎng)方法的確立及培養(yǎng)后細胞的生物學(xué)鑒定.目的:確立生長因子肽進行黑素細胞培養(yǎng)的方法并對得到的細胞進行生物學(xué)鑒定.方法:選用生長因子肽bFGF、ET-1和α-MSH加入MCDB153液中進行正常人體黑素細胞體外培養(yǎng),同時觀察α-MSH對黑素細胞樹突形成的影響.HMB-45抗原的單克隆抗體用于標記黑素小體相關(guān)胞漿抗原,以判斷得到的細胞是否為黑素細胞.利用光鏡、透射電鏡技術(shù)對培養(yǎng)得到的黑素細胞進行生長特性以
2、及形態(tài)、結(jié)構(gòu)上的觀察.結(jié)論:用此方法能夠在短期內(nèi)得到大量增殖的黑素細胞,同時,黑素細胞保持了正常的結(jié)構(gòu)和功能.第二部分:培養(yǎng)后黑素細胞表面HLA-DR抗原表達的研究.目的:進一步研究所選用的生長因子肽以及培養(yǎng)時間對正常人黑素細胞表達HLA-DR抗原的影響.方法:用HLA-DR抗原的單克隆抗體對傳代后第1、2代黑素細胞進行免疫組化染色,設(shè)立同期以TPA,CT作為促分裂劑培養(yǎng)得到的黑素細胞為對照組.用流式細胞儀的方法測定傳代后第8代黑素細胞
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