P物質(zhì)與神經(jīng)生長因子對(duì)正常人外周血中NK細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、人們?cè)谟^察應(yīng)激對(duì)機(jī)體免疫功能影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致免疫功能低下、自然殺傷細(xì)胞活性受到抑制、淋巴細(xì)胞總數(shù)減少、單核細(xì)胞數(shù)減少等等。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對(duì)機(jī)體免疫功能具有重要的調(diào)控作用，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細(xì)胞和其他參與免疫反應(yīng)細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。以往有學(xué)者報(bào)道，SP可促進(jìn)增殖細(xì)胞B產(chǎn)生抗體，并刺激單核細(xì)胞產(chǎn)生某些細(xì)胞因子共同參與免疫調(diào)節(jié)作用。有文獻(xiàn)指出，無論是體外孵育還是體內(nèi)給藥，SP均可增強(qiáng)小腸上皮淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞的

2、活性。體內(nèi)給藥能增加脾臟細(xì)胞的殺傷力。并且HartR等發(fā)現(xiàn)SP能增加人外周血單核樣細(xì)胞的IgM及干擾素的分泌。以上資料均表明P物質(zhì)是體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)性多肽，并且對(duì)免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。神經(jīng)生長因子(nervegrowhfactorNGF)是一種嗜神經(jīng)多肽，亦是發(fā)現(xiàn)最早和已知最典型的神經(jīng)營養(yǎng)因子。其作為一種為感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)元存活分化和功能所必需的神經(jīng)營養(yǎng)多肽在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中起關(guān)鍵性作用。隨著研究的發(fā)展和深入，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)生長因

3、子對(duì)免疫系統(tǒng)及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)也產(chǎn)生重要影響。 NK細(xì)胞是機(jī)體十分重要的細(xì)胞群體，它幾乎參與了免疫系統(tǒng)的發(fā)生、發(fā)展及效應(yīng)等重要環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)過程。目前，對(duì)NK細(xì)胞的研究遠(yuǎn)少于T細(xì)胞和B細(xì)胞，而有關(guān)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)中NK細(xì)胞所擔(dān)任的角色、功能變化的完整的文獻(xiàn)報(bào)道甚少。Hellstrand等發(fā)現(xiàn)如果NK細(xì)胞經(jīng)過低濃度的腎上腺素預(yù)處理，可以提高NK細(xì)胞的活性，但如果10-6M濃度的腎上腺素與NK細(xì)胞同育，則NK細(xì)胞活性會(huì)大大下降。因而

4、，NK細(xì)胞對(duì)應(yīng)激原的反應(yīng)是最敏感的。 神經(jīng)生長因子(NGF)和P物質(zhì)(SP)同屬多肽類物質(zhì)。眾多資料表明，二者對(duì)免疫功能有明顯的調(diào)節(jié)作用。但關(guān)于二者在體外對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞活性的影響均未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了SP和NGF對(duì)人外周血中的NK細(xì)胞活性的影響，以期對(duì)二者在機(jī)體免疫中的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行探討。 實(shí)驗(yàn)材料與方法取對(duì)數(shù)生長期的K562細(xì)胞，用無Ca2+Mg2+的HanK's液洗滌兩次，臺(tái)盼藍(lán)染色，確定細(xì)胞活率＞95％，

5、經(jīng)活細(xì)胞計(jì)數(shù)后，用1％BSA-RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×105/ml細(xì)胞懸液備用。 制備效應(yīng)細(xì)胞步驟為靜脈取血100ml，肝素鈉抗凝后用D-Hank's液稀釋3倍，重層于淋巴細(xì)胞重層液上，2000r/min離心20分鐘，吸取白膜層細(xì)胞。用無Ca2+Mg2+的HanK's液1200r/min離心10分鐘洗滌2次，重懸于RPMI-1640培養(yǎng)液中，臺(tái)盼藍(lán)染色確定細(xì)胞活率＞95％，經(jīng)活細(xì)胞計(jì)數(shù)后，最終用含1％BSA-

6、RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)整為所需細(xì)胞懸液備用。 加入處理因素SP、NGF，檢測NK細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)((-x)±s)表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果當(dāng)效靶比例為100∶1時(shí)，2μg/ml或8μg/mlSP對(duì)NK細(xì)胞活性有抑制作用(P＜0.05)。在效靶比為50∶1時(shí)，8μg/mlSP對(duì)NK細(xì)胞活性有顯著抑制作用(P＜0.05)。在效靶比為25∶1時(shí)，4μg/mlSP對(duì)NK細(xì)胞活性有增強(qiáng)作用(P＜

7、0.05)。 當(dāng)效靶比例為100∶1和25∶1時(shí)，40ng/mlNGF對(duì)NK細(xì)胞活性有抑制作用，(P＜0.05)。 討論在既往研究中，人們觀察應(yīng)激對(duì)機(jī)體免疫功能影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致免疫功能低下、自然殺傷細(xì)胞活性受到抑制、淋巴細(xì)胞總數(shù)減少、單核細(xì)胞數(shù)減少等等。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對(duì)機(jī)體免疫功能具有重要的調(diào)控作用，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細(xì)胞和其他參與免疫反應(yīng)細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。以往有學(xué)者報(bào)道，SP可促進(jìn)增殖

8、細(xì)胞B產(chǎn)生抗體，并刺激單核細(xì)胞產(chǎn)生某些細(xì)胞因子共同參與免疫調(diào)節(jié)作用。有文獻(xiàn)指出，無論是體外孵育還是體內(nèi)給藥，SP均可增強(qiáng)小腸上皮淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞的活性。體內(nèi)給藥能增加脾臟細(xì)胞的殺傷力。并且HartR等發(fā)現(xiàn)SP能增加人外周血單核樣細(xì)胞的IgM及干擾素的分泌。以上資料均表明P物質(zhì)是體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)性多肽，并且對(duì)免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。 NK細(xì)胞是機(jī)體天然存在的抗腫瘤細(xì)胞，其活性的高低與疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有密切的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明S

9、P對(duì)NK細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)與它們的劑量密切相關(guān)。對(duì)上述結(jié)果擬從三個(gè)方面來對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析：(1)SP可促使人外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，其中IFN-γ可增加NK細(xì)胞活性。但如同時(shí)加SP一起預(yù)處理，則使NK細(xì)胞活性降低，部分抵消IFN-γ對(duì)NK活性的上調(diào)效應(yīng)。這可能與SP與細(xì)胞表面受體結(jié)合較多，膜結(jié)構(gòu)變化明顯，阻礙了IFN-γ對(duì)NK細(xì)胞的作用有關(guān)；或是由于SP刺激巨噬細(xì)胞(Mqψ)產(chǎn)生前列腺素等負(fù)調(diào)節(jié)因子增多，抑制了NK細(xì)胞的活性。(2)N

10、K細(xì)胞表面的KIR與細(xì)胞表面的自身MHC-I類分子結(jié)合，可產(chǎn)生殺傷抑制信號(hào)，該信號(hào)在胞內(nèi)起主導(dǎo)作用，能阻斷殺傷信號(hào)傳遞。當(dāng)SP促使外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子時(shí)，在這些細(xì)胞因子刺激下，誘導(dǎo)MHC-I類分子增加，從而使KIR介導(dǎo)的抑制作用占主導(dǎo)地位，表現(xiàn)為NK細(xì)胞活性受到抑制。(3)在效靶比為25∶1時(shí)，4μg/ml的SP對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性有增強(qiáng)作用。原因可能為SP在此濃度下，促使外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生的I

11、FN-γ、TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子對(duì)NK細(xì)胞活性的正向調(diào)節(jié)作用增強(qiáng)。其機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。 NGF作為一種靶源性神經(jīng)營養(yǎng)因子維持著特定類型神經(jīng)元的存在和發(fā)育，這一點(diǎn)已有諸多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)中，NGF在濃度為40ng/ml時(shí)，在效靶比為100∶1，50∶1時(shí)對(duì)NK細(xì)胞的殺傷活性有抑制作用。其機(jī)制可能為：NGF的靶細(xì)胞膜上存在高親合力和低親合力兩種受體，NGF可能與NK細(xì)胞上的NGFR結(jié)合后，內(nèi)化轉(zhuǎn)運(yùn)核周體，進(jìn)而與細(xì)胞核受體

12、結(jié)合而對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生抑制效應(yīng)。 SP、NGF是神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)共同的化學(xué)語言，SP、NGF及其片段在不同條件下所引起的作用具有復(fù)雜性和多樣性。進(jìn)一步研究SP、NGF在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)中的具體作用機(jī)制會(huì)對(duì)免疫性疾病的病理生理本質(zhì)有更新的認(rèn)識(shí)，另一方面也可以掌握臨床疾病的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)方面的新動(dòng)態(tài)，以期對(duì)臨床防治有所幫助。 結(jié)論1P物質(zhì)對(duì)正常人外周血中NK細(xì)胞殺傷活性有雙向調(diào)節(jié)作用。 2神經(jīng)生長因子對(duì)正常