P物質(zhì)與神經(jīng)生長因子對正常人外周血中NK細胞殺傷活性的影響.pdf

1、人們在觀察應激對機體免疫功能影響時發(fā)現(xiàn)，應激會導致免疫功能低下、自然殺傷細胞活性受到抑制、淋巴細胞總數(shù)減少、單核細胞數(shù)減少等等。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對機體免疫功能具有重要的調(diào)控作用，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細胞和其他參與免疫反應細胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。以往有學者報道，SP可促進增殖細胞B產(chǎn)生抗體，并刺激單核細胞產(chǎn)生某些細胞因子共同參與免疫調(diào)節(jié)作用。有文獻指出，無論是體外孵育還是體內(nèi)給藥，SP均可增強小腸上皮淋巴細胞中NK細胞的

2、活性。體內(nèi)給藥能增加脾臟細胞的殺傷力。并且HartR等發(fā)現(xiàn)SP能增加人外周血單核樣細胞的IgM及干擾素的分泌。以上資料均表明P物質(zhì)是體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)性多肽，并且對免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。神經(jīng)生長因子(nervegrowhfactorNGF)是一種嗜神經(jīng)多肽，亦是發(fā)現(xiàn)最早和已知最典型的神經(jīng)營養(yǎng)因子。其作為一種為感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)元存活分化和功能所必需的神經(jīng)營養(yǎng)多肽在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中起關鍵性作用。隨著研究的發(fā)展和深入，科學家們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)生長因

3、子對免疫系統(tǒng)及免疫應答的調(diào)節(jié)也產(chǎn)生重要影響。 NK細胞是機體十分重要的細胞群體，它幾乎參與了免疫系統(tǒng)的發(fā)生、發(fā)展及效應等重要環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)過程。目前，對NK細胞的研究遠少于T細胞和B細胞，而有關神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡中NK細胞所擔任的角色、功能變化的完整的文獻報道甚少。Hellstrand等發(fā)現(xiàn)如果NK細胞經(jīng)過低濃度的腎上腺素預處理，可以提高NK細胞的活性，但如果10-6M濃度的腎上腺素與NK細胞同育，則NK細胞活性會大大下降。因而

4、，NK細胞對應激原的反應是最敏感的。 神經(jīng)生長因子(NGF)和P物質(zhì)(SP)同屬多肽類物質(zhì)。眾多資料表明，二者對免疫功能有明顯的調(diào)節(jié)作用。但關于二者在體外對人外周血單個核細胞活性的影響均未見相關報道。本實驗研究了SP和NGF對人外周血中的NK細胞活性的影響，以期對二者在機體免疫中的調(diào)節(jié)作用進行探討。 實驗材料與方法取對數(shù)生長期的K562細胞，用無Ca2+Mg2+的HanK's液洗滌兩次，臺盼藍染色，確定細胞活率＞95％，

5、經(jīng)活細胞計數(shù)后，用1％BSA-RPMI-1640培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)整為1×105/ml細胞懸液備用。 制備效應細胞步驟為靜脈取血100ml，肝素鈉抗凝后用D-Hank's液稀釋3倍，重層于淋巴細胞重層液上，2000r/min離心20分鐘，吸取白膜層細胞。用無Ca2+Mg2+的HanK's液1200r/min離心10分鐘洗滌2次，重懸于RPMI-1640培養(yǎng)液中，臺盼藍染色確定細胞活率＞95％，經(jīng)活細胞計數(shù)后，最終用含1％BSA-

6、RPMI-1640培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)整為所需細胞懸液備用。 加入處理因素SP、NGF，檢測NK細胞活性。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)((-x)±s)表示，用t檢驗進行顯著性分析。 實驗結(jié)果當效靶比例為100∶1時，2μg/ml或8μg/mlSP對NK細胞活性有抑制作用(P＜0.05)。在效靶比為50∶1時，8μg/mlSP對NK細胞活性有顯著抑制作用(P＜0.05)。在效靶比為25∶1時，4μg/mlSP對NK細胞活性有增強作用(P＜

7、0.05)。 當效靶比例為100∶1和25∶1時，40ng/mlNGF對NK細胞活性有抑制作用，(P＜0.05)。 討論在既往研究中，人們觀察應激對機體免疫功能影響時發(fā)現(xiàn)，應激會導致免疫功能低下、自然殺傷細胞活性受到抑制、淋巴細胞總數(shù)減少、單核細胞數(shù)減少等等。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對機體免疫功能具有重要的調(diào)控作用，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細胞和其他參與免疫反應細胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。以往有學者報道，SP可促進增殖

8、細胞B產(chǎn)生抗體，并刺激單核細胞產(chǎn)生某些細胞因子共同參與免疫調(diào)節(jié)作用。有文獻指出，無論是體外孵育還是體內(nèi)給藥，SP均可增強小腸上皮淋巴細胞中NK細胞的活性。體內(nèi)給藥能增加脾臟細胞的殺傷力。并且HartR等發(fā)現(xiàn)SP能增加人外周血單核樣細胞的IgM及干擾素的分泌。以上資料均表明P物質(zhì)是體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)性多肽，并且對免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。 NK細胞是機體天然存在的抗腫瘤細胞，其活性的高低與疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有密切的關系。實驗結(jié)果表明S

9、P對NK細胞活性的調(diào)節(jié)與它們的劑量密切相關。對上述結(jié)果擬從三個方面來對結(jié)果進行分析：(1)SP可促使人外周血單個核細胞產(chǎn)生IFN-γ，其中IFN-γ可增加NK細胞活性。但如同時加SP一起預處理，則使NK細胞活性降低，部分抵消IFN-γ對NK活性的上調(diào)效應。這可能與SP與細胞表面受體結(jié)合較多，膜結(jié)構(gòu)變化明顯，阻礙了IFN-γ對NK細胞的作用有關；或是由于SP刺激巨噬細胞(Mqψ)產(chǎn)生前列腺素等負調(diào)節(jié)因子增多，抑制了NK細胞的活性。(2)N

10、K細胞表面的KIR與細胞表面的自身MHC-I類分子結(jié)合，可產(chǎn)生殺傷抑制信號，該信號在胞內(nèi)起主導作用，能阻斷殺傷信號傳遞。當SP促使外周血單個核細胞產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α、IL-2等細胞因子時，在這些細胞因子刺激下，誘導MHC-I類分子增加，從而使KIR介導的抑制作用占主導地位，表現(xiàn)為NK細胞活性受到抑制。(3)在效靶比為25∶1時，4μg/ml的SP對NK細胞殺傷活性有增強作用。原因可能為SP在此濃度下，促使外周血單個核細胞產(chǎn)生的I

11、FN-γ、TNF-α、IL-2等細胞因子對NK細胞活性的正向調(diào)節(jié)作用增強。其機制有待于進一步研究。 NGF作為一種靶源性神經(jīng)營養(yǎng)因子維持著特定類型神經(jīng)元的存在和發(fā)育，這一點已有諸多實驗證實。本實驗中，NGF在濃度為40ng/ml時，在效靶比為100∶1，50∶1時對NK細胞的殺傷活性有抑制作用。其機制可能為：NGF的靶細胞膜上存在高親合力和低親合力兩種受體，NGF可能與NK細胞上的NGFR結(jié)合后，內(nèi)化轉(zhuǎn)運核周體，進而與細胞核受體

12、結(jié)合而對靶細胞產(chǎn)生抑制效應。 SP、NGF是神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)共同的化學語言，SP、NGF及其片段在不同條件下所引起的作用具有復雜性和多樣性。進一步研究SP、NGF在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡中的具體作用機制會對免疫性疾病的病理生理本質(zhì)有更新的認識，另一方面也可以掌握臨床疾病的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡方面的新動態(tài)，以期對臨床防治有所幫助。 結(jié)論1P物質(zhì)對正常人外周血中NK細胞殺傷活性有雙向調(diào)節(jié)作用。 2神經(jīng)生長因子對正常