糖尿病谷氨酸脫羧酶（GAD-,65-）反應(yīng)性T細胞的檢測及應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分谷氨酸脫羧酶(GAD<,65>)反應(yīng)性T細胞ELISPOT檢測方法的建立 目的：建立糖尿病谷氨酸脫羧酶(GAD<,65>)反應(yīng)性T細胞ELISPOT檢測的優(yōu)化方案。 方法：選取經(jīng)典TlDM(T1A)患者、特發(fā)TlDM(T1B)患者及健康對照者(Control)各2例，2型糖尿病(T2DM)患者3例；連續(xù)梯度離心分離外周單個核細胞(PBMC)；參照U-CyTech公司(荷蘭)的ELISPOT標(biāo)準(zhǔn)方案凍存、復(fù)蘇PB

2、MC及斑點檢測，包括分泌IFN-γ的Th1斑點(IFN-γ-Th1)及分泌IL-4的Th2斑點(IL-4-Th2)；觀察不同孵育法、孵育時間、刺激抗原、細胞數(shù)及新鮮或凍存細胞等對斑點的影響，并對其進行重復(fù)性評價。 結(jié)論：參照U-CyTech公司的ELISPOT操作規(guī)范，建立了適合研究糖尿病GAD65反應(yīng)性T細胞的ELISPOT的檢測方案。 第二部分GAD<,65>反應(yīng)性T細胞ELISPOT檢測在糖尿病發(fā)病機制探討中的應(yīng)用

3、 目的：比較不同類型糖尿病GAD<,65>反應(yīng)性T細胞及Thl／Th2平衡的差異，探討其細胞免疫致病機制。 方法：選取經(jīng)典T1DM(T1A)患者23例，特發(fā)T1DM(T1B)29例，LADA 17例，三組合并為T1DM組(69例)，2型糖尿病(T2DM)28例，T1DM的一級親屬(FR)18例，健康對照(Contr01)16例，并根據(jù)起病方式分為急性起病糖尿病組及緩慢起病糖尿病組；ELISPOT檢測IFN-γ-Thl、I

4、L-4-Th2及Thl／Th2，1個斑點代表1分泌細胞因子的T細胞；放射配體法檢測胰島自身抗體。 結(jié)論：①不同類型糖尿病具有明顯不同的IFN-γ-Th1細胞及Th1／Th2平衡，TlDM患者循環(huán)中存在明顯增多的IFN-γ-Th1細胞及Th1／Th2平衡更偏向Th1，是其細胞水平的發(fā)病機制，也是急性起病糖尿病發(fā)病的直接原因之一；②絕大多數(shù)T2DM及健康者不存在異常的IFN-γ-Th1及Th1／Th2平衡，T細胞免疫異常可用于鑒別T