糖尿病谷氨酸脫羧酶（GAD-,65-）反應(yīng)性T細(xì)胞的檢測(cè)及應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分谷氨酸脫羧酶(GAD<,65>)反應(yīng)性T細(xì)胞ELISPOT檢測(cè)方法的建立 目的：建立糖尿病谷氨酸脫羧酶(GAD<,65>)反應(yīng)性T細(xì)胞ELISPOT檢測(cè)的優(yōu)化方案。 方法：選取經(jīng)典TlDM(T1A)患者、特發(fā)TlDM(T1B)患者及健康對(duì)照者(Control)各2例，2型糖尿病(T2DM)患者3例；連續(xù)梯度離心分離外周單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)；參照U-CyTech公司(荷蘭)的ELISPOT標(biāo)準(zhǔn)方案凍存、復(fù)蘇PB

2、MC及斑點(diǎn)檢測(cè)，包括分泌IFN-γ的Th1斑點(diǎn)(IFN-γ-Th1)及分泌IL-4的Th2斑點(diǎn)(IL-4-Th2)；觀察不同孵育法、孵育時(shí)間、刺激抗原、細(xì)胞數(shù)及新鮮或凍存細(xì)胞等對(duì)斑點(diǎn)的影響，并對(duì)其進(jìn)行重復(fù)性評(píng)價(jià)。 結(jié)論：參照U-CyTech公司的ELISPOT操作規(guī)范，建立了適合研究糖尿病GAD65反應(yīng)性T細(xì)胞的ELISPOT的檢測(cè)方案。 第二部分GAD<,65>反應(yīng)性T細(xì)胞ELISPOT檢測(cè)在糖尿病發(fā)病機(jī)制探討中的應(yīng)用

3、 目的：比較不同類型糖尿病GAD<,65>反應(yīng)性T細(xì)胞及Thl／Th2平衡的差異，探討其細(xì)胞免疫致病機(jī)制。 方法：選取經(jīng)典T1DM(T1A)患者23例，特發(fā)T1DM(T1B)29例，LADA 17例，三組合并為T1DM組(69例)，2型糖尿病(T2DM)28例，T1DM的一級(jí)親屬(FR)18例，健康對(duì)照(Contr01)16例，并根據(jù)起病方式分為急性起病糖尿病組及緩慢起病糖尿病組；ELISPOT檢測(cè)IFN-γ-Thl、I

4、L-4-Th2及Thl／Th2，1個(gè)斑點(diǎn)代表1分泌細(xì)胞因子的T細(xì)胞；放射配體法檢測(cè)胰島自身抗體。 結(jié)論：①不同類型糖尿病具有明顯不同的IFN-γ-Th1細(xì)胞及Th1／Th2平衡，TlDM患者循環(huán)中存在明顯增多的IFN-γ-Th1細(xì)胞及Th1／Th2平衡更偏向Th1，是其細(xì)胞水平的發(fā)病機(jī)制，也是急性起病糖尿病發(fā)病的直接原因之一；②絕大多數(shù)T2DM及健康者不存在異常的IFN-γ-Th1及Th1／Th2平衡，T細(xì)胞免疫異?？捎糜阼b別T