果蠅MRP1互斥剪接機制及家蠶表達霍亂毒素B亞基與人谷氨酸脫羧酶融合蛋白抗Ⅰ型糖尿病的研究.pdf

1、可變剪接是真核生物RNA轉錄后加工的一種重要的調控機制?；コ饧艚邮且环N特殊的受到嚴格調控的可變剪接形式，它能夠增加蛋白質的多樣性。互斥剪接即互斥外顯子簇中有且只有一個可變外顯子被選擇進入成熟的mRNA，從而形成不同的蛋白質異構體。針對互斥剪接的機制，科研人員提出了幾種調控模型來予以解釋。
　　 MRP基因編碼的多藥耐藥性蛋白是ATP結合域的跨膜轉運蛋白超家族成員之一，是引起腫瘤細胞多藥耐藥性的一個因素。在黑腹果蠅（Drosoph

2、ilamelanogaster）中，MRP1的第八組外顯子含有7個互斥外顯子。本研究首先應用生物信息學的方法得到14種果蠅物種的MRP1基因序列，分析黑腹果蠅的EST序列以及互斥外顯子的進化關系。野生型的minigene中主要表達外顯子8.4，接下來是外顯子8.1和8.8。通過一系列的刪除表達載體的構建，發(fā)現在外顯子8.4上游的108bp和8.4下游的244bp中存在調控元件。這些初期的實驗數據為研究MRP1的互斥剪接調控機制打下了基礎

3、。
　　 Ⅰ型糖尿病是一種器官特異性的自身免疫疾病，它是由于分泌胰島素的β細胞損傷而造成的。霍亂毒素B亞基(CTB)作為一種強大的免疫粘膜載體分子，能夠有效的促進口服免疫耐受。
　　 本研究構建了CTB與人GAD65的融合基因的表達載體，通過Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)在DH10Bac感受態(tài)細胞中發(fā)生轉座重組，利用三抗和藍白斑篩選得到重組的Bacmid質粒。把Bacmid質粒成功轉染家蠶BmN細胞獲得CTB-hG