果蠅MRP1互斥剪接機(jī)制及家蠶表達(dá)霍亂毒素B亞基與人谷氨酸脫羧酶融合蛋白抗Ⅰ型糖尿病的研究.pdf

1、可變剪接是真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后加工的一種重要的調(diào)控機(jī)制?；コ饧艚邮且环N特殊的受到嚴(yán)格調(diào)控的可變剪接形式，它能夠增加蛋白質(zhì)的多樣性。互斥剪接即互斥外顯子簇中有且只有一個(gè)可變外顯子被選擇進(jìn)入成熟的mRNA，從而形成不同的蛋白質(zhì)異構(gòu)體。針對互斥剪接的機(jī)制，科研人員提出了幾種調(diào)控模型來予以解釋。
　　 MRP基因編碼的多藥耐藥性蛋白是ATP結(jié)合域的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員之一，是引起腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的一個(gè)因素。在黑腹果蠅（Drosoph

2、ilamelanogaster）中，MRP1的第八組外顯子含有7個(gè)互斥外顯子。本研究首先應(yīng)用生物信息學(xué)的方法得到14種果蠅物種的MRP1基因序列，分析黑腹果蠅的EST序列以及互斥外顯子的進(jìn)化關(guān)系。野生型的minigene中主要表達(dá)外顯子8.4，接下來是外顯子8.1和8.8。通過一系列的刪除表達(dá)載體的構(gòu)建，發(fā)現(xiàn)在外顯子8.4上游的108bp和8.4下游的244bp中存在調(diào)控元件。這些初期的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為研究MRP1的互斥剪接調(diào)控機(jī)制打下了基礎(chǔ)

3、。
　　 Ⅰ型糖尿病是一種器官特異性的自身免疫疾病，它是由于分泌胰島素的β細(xì)胞損傷而造成的?；魜y毒素B亞基(CTB)作為一種強(qiáng)大的免疫粘膜載體分子，能夠有效的促進(jìn)口服免疫耐受。
　　 本研究構(gòu)建了CTB與人GAD65的融合基因的表達(dá)載體，通過Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中發(fā)生轉(zhuǎn)座重組，利用三抗和藍(lán)白斑篩選得到重組的Bacmid質(zhì)粒。把Bacmid質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染家蠶BmN細(xì)胞獲得CTB-hG