miR-155在胃癌中的表達及其對人胃癌細胞增殖與凋亡影響的研究.pdf

1、目的:檢測miRNA-155在胃癌組織中的表達情況,并分析其與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移等的關(guān)系。并通過RNA干擾上調(diào)miR-155表達,觀察miR-155表達改變對人胃癌SGC-7901細胞株增殖、周期、凋亡的影響,探討miR-155在胃癌中的生物學作用,進一步分析其潛在靶基因,為胃癌的靶向基因治療奠定基礎。
　　方法:1、收集胃癌患者標本42例,同時采取癌組織及相應的癌旁非腫瘤組織。通過SYBR GREEN熒光定

2、量PCR(qRT-PCR)檢測各組織中miR-155的表達水平,比較胃癌組織與癌旁組織中miR-155的表達差異。分析miR-155的表達與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤程度、分化程度、TNM分期、血管侵襲等病理特征的關(guān)系。
　　2、以脂質(zhì)體(lipofectamineTM2000)為載體將帶熒光標記的陰性對照鏈轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細胞并用倒置熒光顯微鏡觀測從而篩選出最佳轉(zhuǎn)染條件。設計制備針對miR-155的mimics

3、序列,以最佳轉(zhuǎn)染條件轉(zhuǎn)染細胞后采用qRT-PCR驗證干擾效果以備后續(xù)實驗用。將擾片段miR-155mimics按最佳轉(zhuǎn)染條件對miR-155低表達細胞株SGC-7901進行轉(zhuǎn)染干擾,再分別采用CCK8法,流式細胞術(shù)(FCM)檢測mimics干擾miR-155后對胃癌SGC-7901細胞增殖,凋亡、周期的影響。
　　結(jié)果:1、胃癌腫瘤組織中miR-155表達量明顯低于癌旁組織,差異有顯著性(P<0.05)。miR-155的表達與胃癌

4、的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)。miR-155的表達與腫塊的位置、患者的年齡、性別、病理分級、血管侵襲、TNM分期等其他臨床病理因素之間未見顯著相關(guān)性。
　　2、經(jīng)實驗摸索,細胞數(shù)約為每孔1.5×106個、siRNA濃度約為80pmol/μL, Lipofectamine2000與mimics比例為5ul:5ul(6孔板)時,有較佳的轉(zhuǎn)染效率,繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后細胞miR-155的表達顯著提高(P<0

5、.05)。與空白對照組和陰性對照組相比,miR-155-mimics過表達組SGC-7901細胞的增殖速度顯著降低;轉(zhuǎn)染48小時后流式細胞儀檢測各實驗組細胞凋亡率顯示,miR-155-mimics過表達組凋亡率明顯高于空白對照組和陰性對照組,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。細胞周期檢測結(jié)果顯示miR-155-mimics過表達組與空白對照組和陰性對照組相比較,差異無明顯統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:1、miR-155在胃癌組織中的表達