PPARγ途徑在NSAIDs影響胃癌細胞凋亡及增殖中的作用及其機制.pdf

1、目的：通過培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞和建立裸鼠胃癌移植瘤模型，分別在體內和體外觀察過氧化物酶增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor γ，PPARγ)抑制劑干預后，非甾體抗炎藥(non-steroidal anti-inflammationdrugs，NSAIDs)對胃癌細胞凋亡和增殖影響的變化，探討PPART途徑在NSAIDs抗癌機制中的意義。 方法： 1

2、．體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞，PPARγ抑制劑GW9662預先干預，半小時后分別加入舒林酸或尼美舒利繼續(xù)培養(yǎng)，同時設立不加藥、單用GW9662、單用舒林酸或尼美舒利對照組。MTT檢測藥物作用后各組細胞生長抑制率；FCM檢測細胞凋亡及細胞周期的變化。 2．選擇健康雄性BALB/c裸小鼠，建立人胃癌SGC．7901移植瘤模型，腹腔注射GW9662+N(nimesulide，尼美舒利)，同時設立生理鹽水、GW9662、尼美舒利

3、三個對照組。用藥21天后，檢測并記錄移植瘤體積；腫瘤組織HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)；免疫組化法分別檢測移植瘤PPARγ、p<'21Wafl>、p<'27Kipl>、Bcl-2、Bax、VEGF、NF-KB蛋白的表達。 結果： 1．MTT對細胞增殖率的檢測：MTT檢測結果顯示，GW9662組較正常組無明顯變化；舒林酸、尼美舒利組呈時間依賴性抑制SGC-7901細胞增殖；GW9662+S(sulindac，舒林酸)組、GW96

4、62+N組結果表明，一定范圍內GW9662呈劑量依賴性減弱舒林酸、尼美舒利抑制細胞增殖的作用，一定時間內，GW9662對舒林酸或尼美舒利的抑制細胞增殖的作用逐漸增強，在24小時達高峰。 2．流式細胞術對腫瘤細胞凋亡的檢測：FCM結果可見，GW9662組較正常組無明顯變化；舒林酸、尼美舒利組SGC-7901細胞出現(xiàn)明顯凋亡，細胞阻滯在G<,0>/G<,1>期，S期和G<,2>/M期細胞比例減少；GW9662+S組、GW9662+N

5、組顯示，GW9662能減弱舒林酸、尼美舒利的促胃癌細胞凋亡的作用，改變細胞周期，GW9662+S或N作用于SGC.7901細胞，24h后細胞凋亡率較單用舒林酸、尼美舒利明顯降低，細胞在G<,0>/G<,1>期受阻滯的比例降低；S期和G<,2>/M期細胞比例升高。 3.裸鼠移植瘤體積：檢測用藥3周后各組裸鼠移植瘤的體積，應用尼美舒利組裸鼠移植瘤體積較生理鹽水對照組明顯小，分別為2.50±1.08 mm<'3>和63.83±17.0

6、8 mm<'3>，而GW9662+N組為44.17±10.98mm<'3>，各組之間差異有顯著性(P<0.05)。 4.移植瘤組織HE染色：移植瘤組織HE染色：生理鹽水組、GW9662組細胞核內染色質松散，可見核仁，顯示細胞增殖活躍，而尼美舒利組細胞核深染，很少見核仁，切片內還可見到壞死的組織，GW9662+N組可見部分細胞核染色質松散，部分細胞核深染，提示尼美舒利的抑制腫瘤的作用被GW9662部分減弱。 5.免疫組化法

7、檢測：裸鼠移植瘤組織PPAR3,、p<'21Wafl>、 p<'27Kipl>、Bcl-2、Bax、VEGF、NF-kB蛋白的表達：GW9662組較正常組無明顯變化；尼美舒利組較對照組移植瘤組織的PPARγ蛋白表達明顯增強，同時p<,21Wafl>、p<,27Kipl>、Bax蛋白表達亦明顯增強，而Bcl-2、VEGF和NF-kB的表達減低；GW9662+N組小鼠與尼美舒利組相比，移植瘤組織的PPARγ蛋白表達減低，同時p<,21Waf