5-Aza-dC和TSA對胃癌細胞系中MGMT和E-cadherin基因表達的影響.pdf

1、目的: 抑癌基因的失活和癌基因的激活是人類腫瘤形成的重要分子事件。尤其是基因突變和抑制腫瘤形成的抑癌基因表達的缺失是導(dǎo)致腫瘤形成的重要原因。近來的研究證實某些抑癌基因DNA啟動子區(qū)域的高甲基化所引起的轉(zhuǎn)錄沉默是導(dǎo)致腫瘤形成的第二種潛在機制。在哺乳動物中，DNA甲基化作為一種表遺傳學修飾方式在基因表達調(diào)控方面發(fā)揮重要作用。表遺傳學不同于基因序列改變(如基因突變)所致基因表達水平的變化，指發(fā)生在基因表達水平的可遺傳的、無DNA序列變

2、化的改變。 胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，全球胃癌死亡率在所有惡性腫瘤死亡率中位居第二。胃癌的發(fā)生與其他惡性腫瘤一樣是多基因、多階段變異累積形成的病理過程。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)胃癌中存在多種因DNA甲基化而失活的基因，其中包括腫瘤抑制基因、細胞周期調(diào)節(jié)基因、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因以及DNA錯配修復(fù)基因等。 本研究旨在討論腫瘤抑制基因O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)和E-鈣粘蛋白(E-cad)在胃癌細胞系中的甲基化狀況

3、，分析腫瘤抑制基因DNA甲基化與基因失活的關(guān)系以及應(yīng)用DNA甲基化抑制劑和組蛋白去乙酰化抑制劑對DNA甲基化水平和基因表達的影響，為進一步探索胃癌發(fā)生的分子生物學機制和通過改變抑癌基因甲基化的表遺傳學治療腫瘤提供新的思路。 材料和方法: 1、胃癌細胞系培養(yǎng)及5-Aza-dC、TSA干預(yù)：采用體外培養(yǎng)的胃癌細胞系MGC-803和MKN-45，分成四組，分別或聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-dC及TSA干預(yù)。①未加藥正常對照組；②加5μ

4、mol/L 5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-dC)培養(yǎng)72h；③加古菌素A(TSA)300nmol/L培養(yǎng)24h；④加5μmol/L 5-Aza-dC培養(yǎng)48h后加TSA 300nmol/L繼續(xù)培養(yǎng)24h。 2、甲基化特異性PCR法(MSP)：采用MSP法檢測經(jīng)5-Aza-dC和TSA干預(yù)前后胃癌細胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad基因的甲基化水平。 3、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)：采

5、用RT-PCR法檢測經(jīng)5-Aza-dC和TSA干預(yù)前后胃癌細胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad的基因mRNA表達水平。 結(jié)果: 1、MSP檢測發(fā)現(xiàn)胃癌細胞系MGC-803中MGMT基因高甲基化，而胃癌細胞系MKN-45中E-cad基因部分甲基化。5-Aza-dC能夠誘導(dǎo)甲基化的MGMT和E-cad基因去甲基化。 2、RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)胃癌細胞系中甲基化的MGMT和E-cad基因表達缺失或者下

6、調(diào)，而經(jīng)過5-Aza-dC干預(yù)后，mRNA恢復(fù)表達或者表達增強。聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-dC和TSA可更大程度上恢復(fù)mRNA的表達。 結(jié)論: 1、胃癌細胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad基因表達水平與DNA甲基化狀況相關(guān)。胃癌細胞系中MGMT和E-cad基因啟動子區(qū)域出現(xiàn)異常甲基化，可能是導(dǎo)致其基因失活的主要原因。 2、5-Aza-dC能夠誘導(dǎo)胃癌細胞系中甲基化的MGMT和E-cad基因去甲基化并