5-Aza-dC和TSA對(duì)胃癌細(xì)胞系中MGMT和E-cadherin基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 抑癌基因的失活和癌基因的激活是人類腫瘤形成的重要分子事件。尤其是基因突變和抑制腫瘤形成的抑癌基因表達(dá)的缺失是導(dǎo)致腫瘤形成的重要原因。近來(lái)的研究證實(shí)某些抑癌基因DNA啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化所引起的轉(zhuǎn)錄沉默是導(dǎo)致腫瘤形成的第二種潛在機(jī)制。在哺乳動(dòng)物中，DNA甲基化作為一種表遺傳學(xué)修飾方式在基因表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮重要作用。表遺傳學(xué)不同于基因序列改變(如基因突變)所致基因表達(dá)水平的變化，指發(fā)生在基因表達(dá)水平的可遺傳的、無(wú)DNA序列變

2、化的改變。 胃癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，全球胃癌死亡率在所有惡性腫瘤死亡率中位居第二。胃癌的發(fā)生與其他惡性腫瘤一樣是多基因、多階段變異累積形成的病理過(guò)程。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)胃癌中存在多種因DNA甲基化而失活的基因，其中包括腫瘤抑制基因、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因以及DNA錯(cuò)配修復(fù)基因等。 本研究旨在討論腫瘤抑制基因O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)和E-鈣粘蛋白(E-cad)在胃癌細(xì)胞系中的甲基化狀況

3、，分析腫瘤抑制基因DNA甲基化與基因失活的關(guān)系以及應(yīng)用DNA甲基化抑制劑和組蛋白去乙?；种苿?duì)DNA甲基化水平和基因表達(dá)的影響，為進(jìn)一步探索胃癌發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制和通過(guò)改變抑癌基因甲基化的表遺傳學(xué)治療腫瘤提供新的思路。 材料和方法: 1、胃癌細(xì)胞系培養(yǎng)及5-Aza-dC、TSA干預(yù)：采用體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞系MGC-803和MKN-45，分成四組，分別或聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-dC及TSA干預(yù)。①未加藥正常對(duì)照組；②加5μ

4、mol/L 5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-dC)培養(yǎng)72h；③加古菌素A(TSA)300nmol/L培養(yǎng)24h；④加5μmol/L 5-Aza-dC培養(yǎng)48h后加TSA 300nmol/L繼續(xù)培養(yǎng)24h。 2、甲基化特異性PCR法(MSP)：采用MSP法檢測(cè)經(jīng)5-Aza-dC和TSA干預(yù)前后胃癌細(xì)胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad基因的甲基化水平。 3、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)：采

5、用RT-PCR法檢測(cè)經(jīng)5-Aza-dC和TSA干預(yù)前后胃癌細(xì)胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad的基因mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: 1、MSP檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞系MGC-803中MGMT基因高甲基化，而胃癌細(xì)胞系MKN-45中E-cad基因部分甲基化。5-Aza-dC能夠誘導(dǎo)甲基化的MGMT和E-cad基因去甲基化。 2、RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞系中甲基化的MGMT和E-cad基因表達(dá)缺失或者下

6、調(diào)，而經(jīng)過(guò)5-Aza-dC干預(yù)后，mRNA恢復(fù)表達(dá)或者表達(dá)增強(qiáng)。聯(lián)合應(yīng)用5-Aza-dC和TSA可更大程度上恢復(fù)mRNA的表達(dá)。 結(jié)論: 1、胃癌細(xì)胞系MGC-803和MKN-45中MGMT和E-cad基因表達(dá)水平與DNA甲基化狀況相關(guān)。胃癌細(xì)胞系中MGMT和E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)域出現(xiàn)異常甲基化，可能是導(dǎo)致其基因失活的主要原因。 2、5-Aza-dC能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞系中甲基化的MGMT和E-cad基因去甲基化并