CDX2基因過表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系BGC-823基因表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的:觀察轉(zhuǎn)染CDX2基因前后人胃癌細(xì)胞系BGC-823基因表達(dá)譜的變化。
　　方法:經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)真核表達(dá)載體pEGFP-C1-CDX2和空載體pEGFP-C1轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系BGC-823,G418抗性克隆篩選后獲取穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞,利用RT-PCR和Western blot檢測(cè)CDX2基因的表達(dá)。應(yīng)用人類表達(dá)譜芯片Affymetrix2.0篩選兩組細(xì)胞的差異表達(dá)基因(以表達(dá)差異≥2.0或≤0.5倍為限),選擇部分差異表達(dá)基因進(jìn)行R

2、eal-time PCR驗(yàn)證。利用RT-PCR檢測(cè)人胃癌細(xì)胞MGC-803、BGC-823、SGC-7901和正常胃粘膜細(xì)胞GES-1以及10例胃癌組織和相應(yīng)癌旁組織中這些差異表達(dá)基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果: RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染組有CDX2基因mRNA和蛋白表達(dá),空白細(xì)胞組和空載體組中無明顯CDX2基因表達(dá)?；蛐酒Y選出CDX2轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞BGC-823差異表達(dá)基因599個(gè),其中上調(diào)基因275

3、個(gè),下調(diào)基因324個(gè),這些基因主要涉及細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白酶活性、細(xì)胞粘附等方面;Real-time PCR檢測(cè)6個(gè)差異表達(dá)基因DKK3、FOXP1、TWIST1、GATA6、RUNX3和BMP2,其結(jié)果與芯片結(jié)果一致,確定芯片結(jié)果可靠。RT-PCR檢測(cè)這6個(gè)差異表達(dá)基因在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)存在差異性(P<0.05),在人胃癌細(xì)胞株和正常胃粘膜細(xì)胞株中的表達(dá)也存在差異性(P<0.05)。
　　結(jié)論: CD