版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、隨著表觀遺傳學(xué)研究的深入,基因的異常甲基化已經(jīng)受到人們的充分認(rèn)識(shí),腫瘤相關(guān)基因發(fā)生的甲基化,可以導(dǎo)致其表達(dá)失活從而喪失其功能。因此在腫瘤的早期診斷和篩查過(guò)程中,基因異常甲基化的改變也許可以為此提供一個(gè)重要的分子標(biāo)記。去甲基化藥物的機(jī)制和作用,目前大都處于研究階段,它的出現(xiàn)也為臨床腫瘤病人的治療提供一個(gè)新的方法和途徑。食管癌是一種我國(guó)常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,嚴(yán)重的威脅了人類(lèi)的健康。對(duì)于食管癌相關(guān)基因甲基化情況的研究,目前相對(duì)集中在某些抑癌基
2、因,錯(cuò)配修復(fù)基因等。而細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 TIMP3和與腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)的E-cadherin基因,在食管癌中的甲基化情況還未完全明了。其表達(dá)狀態(tài)的改變與甲基化修飾是否有關(guān)?改變這些基因的甲基修飾狀態(tài)對(duì)食管癌細(xì)胞中該基因表達(dá)是否會(huì)有影響及對(duì)細(xì)胞的腫瘤特性有何影響均未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
本研究采用甲基化特異性PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法,觀察食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-cadherin基因甲基化的水平及蛋白表達(dá)情
3、況,初步探討其基因表達(dá)失活與甲基化的關(guān)系。并用去甲基化藥5-雜氮-2’-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)和傳統(tǒng)化療藥物5-Fu,分別處理食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706,觀察這兩種藥物作用后TIMP3、E-cadherin基因甲基化狀態(tài)、蛋白表達(dá)的改變及對(duì)細(xì)胞周期的影響,了解去甲基化藥物的優(yōu)勢(shì)及前景,為藥物應(yīng)用于臨床治療提供依據(jù)
方法:
1體外培養(yǎng)的食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706,于RPMI1640培養(yǎng)基(內(nèi)
4、含10%胎牛血清和100U/ml青霉素、100U/ml鏈霉素)中貼壁培養(yǎng)(37℃,5%CO2)。觀察細(xì)胞形態(tài)。
2提取細(xì)胞EC1和EC9706的DNA,經(jīng)質(zhì)量鑒定后,應(yīng)用甲基化特異性PCRt(MSP)的方法,檢測(cè)食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-cadherin基因甲基化的水平。
3制作細(xì)胞爬片,應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法,檢測(cè)食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-cadherin蛋白
5、表達(dá)的情況。
4體外培養(yǎng)的兩種食管癌細(xì)胞系,分別在含5-雜氮-2’-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)的培養(yǎng)基,及含5-Fu的培養(yǎng)基中,貼壁培養(yǎng)(37℃,5%CO2),并觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。
5提取用藥物干預(yù)后的細(xì)胞EC1和EC9706的DNA,經(jīng)質(zhì)量鑒定后,應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)的方法,檢測(cè)TIMP3和E-cadherin基因甲基化的水平的變化。
6制作經(jīng)藥物處理后的細(xì)胞的爬片,用免疫細(xì)
6、胞化學(xué)的方法檢測(cè)TIMP3和E-cadherin基因蛋白表達(dá)改變的情況。
7同時(shí)培養(yǎng)未加藥的EC1和EC9706細(xì)胞,及經(jīng)5-Aza-CdR和5-Fu處理過(guò)的細(xì)胞,消化離心后,乙醇固定,進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。
結(jié)果:
1 TIMP3基因在食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706中都表現(xiàn)為非甲基化,且蛋白呈現(xiàn)弱表達(dá)。E-cadherin基因在食管癌細(xì)胞系EC1中發(fā)生甲基化,在EC9706中發(fā)生
7、半甲基化,其蛋白表達(dá)均缺失。
2 TIMP3基因在經(jīng)5-Aza-CdR和5-Fu作用后的EC1和EC9706細(xì)胞系中,仍為非甲基化;而在EC1中發(fā)生甲基化、EC9706中發(fā)生半甲基化的E-cadherin基因,經(jīng)5-Aza-CdR作用后,甲基化的狀況都得到了逆轉(zhuǎn);經(jīng)5-Fu作用后的兩種細(xì)胞系中該甲基化的情況沒(méi)有改變。
3但經(jīng)藥物5-Aza-CdR和5-Fu分別作用后,TIMP3和E-cadherin基因的蛋白
8、表達(dá)都由原來(lái)的弱表達(dá)和不表達(dá),轉(zhuǎn)變?yōu)楸磉_(dá)增強(qiáng)和表達(dá)。
45-Aza-CdR和5-Fu均能使處于G1期的細(xì)胞比例增加,S期的細(xì)胞減少。用藥組與未加藥組之間及兩種藥物組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1在食管癌細(xì)胞系EC1和EC9706中呈低表達(dá)的兩種基因E-cadherin、TIMP3其甲基化狀態(tài)不同,前者甲基化程度高,而后者未發(fā)生甲基化。E-cadherin基因的甲基化可能為臨
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 結(jié)腸癌細(xì)胞系中E-cadherin甲基化狀況的研究.pdf
- 食管癌細(xì)胞株中T-cadherin基因表達(dá)及其甲基化調(diào)控研究.pdf
- 肺癌細(xì)胞系中RASSF1A基因甲基化研究.pdf
- 胃癌細(xì)胞系中死亡受體甲基化的研究.pdf
- 非小細(xì)胞肺癌中E-cadherin基因甲基化檢測(cè)及其臨床意義.pdf
- E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化及甲基化結(jié)合蛋白MeCP-,2-的研究.pdf
- 基因芯片定量檢測(cè)急性白血病E-cadherin基因甲基化的研究.pdf
- 5-Aza-dC和TSA對(duì)胃癌細(xì)胞系中MGMT和E-cadherin基因表達(dá)的影響.pdf
- 食管癌細(xì)胞MT-3基因CpG島超甲基化的意義以及食管癌組織DNA提取方法的優(yōu)化.pdf
- 原發(fā)性小腸腺癌中E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)的研究.pdf
- 不同轉(zhuǎn)移潛能人食管癌細(xì)胞系的建立及食管癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的研究.pdf
- 胃癌E-cadherin基因突變、啟動(dòng)子甲基化和蛋白表達(dá)的研究.pdf
- 食管癌相關(guān)基因MGMT異常甲基化研究.pdf
- Twist基因聯(lián)合P53、E-cadherin檢測(cè)在食管癌中的意義.pdf
- E-cadherin蛋白在食管癌中的表達(dá)特點(diǎn)及意義.pdf
- 腎癌中E-cadherin甲基化狀態(tài)的檢測(cè)及其與β-catenin表達(dá)關(guān)系的研究.pdf
- 肝癌細(xì)胞系中多基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化狀態(tài)及逆轉(zhuǎn)的研究.pdf
- 5-Aza-CdR對(duì)腎細(xì)胞癌Caki-1細(xì)胞生長(zhǎng)及E-cadherin基因甲基化的影響.pdf
- 食管癌組織中ZIP5基因的表達(dá)以及穩(wěn)定低表達(dá)ZIP5基因食管癌細(xì)胞系的構(gòu)建.pdf
- 食管癌高發(fā)區(qū)人群Survivin、VEGF和E-cadherin與食管癌預(yù)后關(guān)系的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論