鵝正常肝臟與肥肝差異表達(dá)蛋白質(zhì)檢測(cè)與分析.pdf

1、鵝肥肝形成過程中，肝臟在形態(tài)與組成等方面產(chǎn)生了一系列變化，而這些變化的物質(zhì)基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)。本研究以12只110日齡朗德鵝為實(shí)驗(yàn)材料(填肥組和對(duì)照組各6只)，填肥組采用高能玉米飼料填飼，對(duì)照組正常飼喂，填飼18天后，屠宰取肝，采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找正常鵝肝臟與填肥鵝肝臟中差異表達(dá)蛋白。主要研究結(jié)果如下： (1)蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明銀染Schevchenko法的靈敏度在50ng水平上，Blum法的靈敏度在5～50ng之間，GE法的檢測(cè)靈敏

2、度高于5ng，經(jīng)典考馬斯亮蘭染色的檢測(cè)靈敏度在0.05-0.51μg之間。 (2)采用雙向凝膠電泳分別分離朗德鵝正常肝臟和填肥肝臟組織蛋白質(zhì)，GE法銀染，凝膠圖譜顯示朗德鵝肝臟組織蛋白質(zhì)多集中于pI 4-6和43.97.4Kda。 (3)PDQuest軟件進(jìn)行圖像分析，獲得45個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，對(duì)45個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS鑒定，使用國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)上Matrix Science公司提供的肽質(zhì)量指紋圖譜鑒定程

3、序進(jìn)行查詢，獲得11個(gè)具有研究意義的蛋白質(zhì)：谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體，在肥肝中表達(dá)量降低，細(xì)胞外高水平的谷氨酸會(huì)可能影響鵝中樞神經(jīng)系統(tǒng)；磷酸甘油酸變位酶與磷酸丙糖異構(gòu)酶，這兩種酶在肥肝中表達(dá)量降低，從蛋白質(zhì)水平說明填肥鵝對(duì)能量的需求低于正常鵝；谷胱甘肽硫-轉(zhuǎn)移酶，該酶在肥肝中表達(dá)量下降，表明填肥鵝肝臟清除親脂化合物和解毒功能能力降低；鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶，該酶在肥肝中表達(dá)量下調(diào)，表明血液中氨濃度升高，可能會(huì)對(duì)填肥鵝腦細(xì)胞造成傷害；GTP環(huán)化水解酶I，該酶在