鵝肝臟差異表達(dá)基因的分離和鑒定暨茶多酚對(duì)朗德鵝肥肝抗氧化性能影響的研究.pdf

1、超飼養(yǎng)(Overfeeding)引起鵝肝臟代謝發(fā)生改變,使得大量脂肪沉積在肝臟中形成肥肝(fatty liver)。不同品種鵝對(duì)超飼養(yǎng)導(dǎo)致的肝臟代謝改變的敏感程度不同,所以肥肝性能差異很大。但目前鵝肥肝形成的分子機(jī)理仍然不清楚。本研究以朗德鵝和溆浦鵝為試驗(yàn)材料,利用mRNA差異顯示技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù),對(duì)兩個(gè)品種之間、肥肝和普通肝臟之間差異表達(dá)基因進(jìn)行了分離和鑒定,并通過(guò)生物信息學(xué)方法從蛋白質(zhì)和核酸兩個(gè)水平上進(jìn)行了結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè),取

2、得了如下研究結(jié)果:
　　 實(shí)驗(yàn)使用了90對(duì)差異顯示引物來(lái)研究?jī)蓚€(gè)品種鵝肥肝和普通肝臟中mRNA表達(dá)水平對(duì)超飼養(yǎng)的反應(yīng)情況,并用熒光定量PCR進(jìn)行了驗(yàn)證。6個(gè)基因被證實(shí)在肥肝和普通肝臟之間差異表達(dá),其中3個(gè)基因表達(dá)水平被上調(diào),2個(gè)基因被下調(diào),1個(gè)基因在兩個(gè)品種試驗(yàn)鵝中表現(xiàn)了相反的調(diào)控狀態(tài)。
　　 基因8216的表達(dá)水平在肥肝中被上調(diào)了,并且朗德鵝肝臟(LL和LFL)中的表達(dá)水平高于溆浦鵝(XpL和XpFL,)。這個(gè)基因的全

3、長(zhǎng)cDNA是1797bp,GenBank登陸號(hào):EF488993,經(jīng)過(guò)比對(duì),這個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA序列與雞硒結(jié)合蛋白1(selenium binding protein1,SELENBP1；XM_423397.2)基因有92％的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個(gè)cDNA序列含有一個(gè)1413bp的開(kāi)放讀碼框(ORF),編碼一個(gè)471個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。這個(gè)蛋白質(zhì)中含有一個(gè)56 kDa的硒結(jié)合蛋白(SBP56)保守結(jié)構(gòu)域。聚類分析表明,該蛋白質(zhì)與雞、

4、大鼠、人、猴、狗、牛、小鼠的SBP56蛋白分別具有95％、86％、86％、86％、86％、86％、84％的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因8216在肝臟和腎臟中表達(dá)豐富,在脾臟中中等表達(dá),在卵巢、子宮、肌胃和腹脂中表達(dá)量較低。
　　 基因9105的表達(dá)水平在肥肝中被上調(diào)了。經(jīng)過(guò)cDNA克隆,得到一個(gè)包含全長(zhǎng)CDS的1248bp的cDNA片段,GenBank登陸號(hào):EF541127。比對(duì)的結(jié)果表明,該片段與雞的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-2

5、mRNA(transforming growth factor beta2,TGFB2；NM001031045.1)有94％的同源性,與其它物種的TGFB2也有很高的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個(gè)cDNA序列含有一個(gè)1239bp的開(kāi)放讀碼框架(ORF),編碼一個(gè)有412個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。BlastP分析表明,該蛋白質(zhì)序列存在著2個(gè)保守的功能域,一個(gè)是引導(dǎo)序列(TGFb前肽),另一個(gè)是功能結(jié)構(gòu)域(TGFβ)。聚類分析表明,該蛋白質(zhì)與雞、非洲爪

6、蛙、大鼠、人、短尾猊、牛、小鼠、豬、綿羊的TGFb2蛋白分別具有99％、96％、87％、90％、91％、89％、88％、90％、89％的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因9105在肌胃中表達(dá)很豐富,在肝臟、脾臟和卵巢中表達(dá)也較豐富,在子宮、肺和肌肉中中等表達(dá),而在腎臟和腹脂中表達(dá)量較低。
　　 基因7501的表達(dá)水平在肥肝中被上調(diào)了,肥肝中(LFL和XpFL,)高于普通肝臟(LL和XpL),朗德鵝(LL和LFL)高于溆浦鵝(XpL

7、和XpFL)。經(jīng)過(guò)cDNA克隆,得到一個(gè)1446bp的cDNA片段。經(jīng)過(guò)比對(duì),這個(gè)基因的部分cDNA序列與雞的細(xì)胞質(zhì)NADP(+)-依賴型蘋(píng)果酸酶1mRNA(malic enzyme1。NADP(+)-dependent,cytosolic,ME1；NM_204303.1)有93％的同源性,與其它物種的ME1也有很高的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因7501在肝臟中表達(dá)很豐富,在脾臟、卵巢、子宮、肺、腎臟、肌胃和肌肉中中等表達(dá),而在腹脂

8、中表達(dá)量最低。
　　 基因8407的表達(dá)水平在肥肝中被下調(diào)了。經(jīng)過(guò)cDNA克隆,得到一個(gè)包含全長(zhǎng)CDS的1269bp的cDNA片段,GenBank登陸號(hào):EF541128。比對(duì)的結(jié)果表明,該片段與雞的細(xì)胞質(zhì)異檸檬酸脫氫酶mRNA(cytosolic NADP-dependent isocitratedehydrogenase,IDH1；XM_421965)有95％的同源性,與其它物種的IDH1也有很高的同源性。序列分析發(fā)現(xiàn),這個(gè)

9、cDNA序列含有一個(gè)1248bp的開(kāi)放讀碼框架(ORF),編碼一個(gè)有415個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。BlastP分析表明,該蛋白質(zhì)序列存在著一個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域,這個(gè)結(jié)構(gòu)域與已知的真核蛋白Icd具有較高的同源性。聚類分析表明,該蛋白質(zhì)與雞、大鼠、人、猿、牛、小鼠的Icd蛋白分別具有99％、89％、90％、90％、88％、88％的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因8407在肝臟中表達(dá)豐富,在脾臟、腎臟和肌胃中中等表達(dá),在卵巢、子宮、肺、肌肉和腹脂中表達(dá)

10、量較低。
　　 基因9302的表達(dá)水平在肥肝中被下調(diào)了。經(jīng)過(guò)cDNA克隆,得到一個(gè)943bp的cDNA片段。經(jīng)過(guò)比對(duì),這個(gè)基因的部分cDNA序列與雞的膽固醇-7α羥化酶基因(Cytochrome P450,family7,subfamily A,polypeptide1,CYP7A1；XM_419217)有93％的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因9302在肝臟中表達(dá)很豐富,在其它組織中不表達(dá)。
　　 基因7102的表達(dá)水

11、平在兩種鵝中表現(xiàn)了相反的調(diào)控狀態(tài),朗德鵝肥肝中基因7102的表達(dá)水平被上調(diào)了,而在溆浦鵝肥肝中被下調(diào)了。經(jīng)過(guò)cDNA克隆,得到一個(gè)923bp的cDNA片段。經(jīng)過(guò)比對(duì),這個(gè)基因的部分cDNA序列與雞的NAD依賴型蘋(píng)果酸脫氫酶基因(malate dehydrogenase1,NAD(soluble),mRNA,MDH1；NM_001006395.1)有95％的同源性,與其它物種的MDH1基因也有很高的同源性。組織表達(dá)分析顯示,鵝基因7102