白藜蘆醇抗動(dòng)脈粥樣硬化作用分子機(jī)制的研究.pdf

1、白藜蘆醇(Res)是紅葡萄酒中具有心血管保護(hù)作用的最重要的物質(zhì)，可通過其強(qiáng)大的抗炎作用發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。CD40途徑參與了動(dòng)脈粥樣硬化(AS)中主要細(xì)胞成分的炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)，在動(dòng)脈粥樣硬化的各個(gè)階段均發(fā)揮著重要作用。 目的：研究白藜蘆醇對單核細(xì)胞趨化相關(guān)分子的影響、抗氧化、穩(wěn)定粥樣斑塊的作用及其與CD40途徑的關(guān)系，探討白藜蘆醇抗動(dòng)脈粥樣硬化分子作用機(jī)制。 方法：將體外培養(yǎng)的單核細(xì)胞(THP-1)隨即分為：空白組、1

2、μmol/LRes組、10μmol/LRes組、50μmol/LRes組，Res孵育24h后，半定量RT-PCR方法檢測單核細(xì)胞趨化蛋白受體2(CCR2)基因的表達(dá)。用佛波酯醇(PMA)誘導(dǎo)THP-1分化為巨噬細(xì)胞(Mφ)。利用腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、sCD40L活化體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和巨噬細(xì)胞將體外培養(yǎng)的HUVEC和Mφ隨機(jī)分為五組：空白組、TNF-α(10μg/L)組,TNF-α(10μg/L)+(1μ

3、mol/L、10μmol/L、50μmoI/L)Res組或sCD40L(10μg/ml)組、sCD40L(10μg/ml)+(1μmol/L、10μmol/L、50μmoI/L)Res組。藥物處理組實(shí)驗(yàn)順序?yàn)镽es預(yù)孵育2h后，加入TNF-α或sCD40L刺激細(xì)胞，半定量RT-PCR方法檢測Mφ內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9/組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(MMP-9/TIMP-1)基因的轉(zhuǎn)錄水平，Western Blot、明膠酶譜法檢測MMP-

4、9/TIMP-1蛋白表達(dá)水平和酶活性，ELISA測HUVEC單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP-1)的分泌，免疫熒光法檢測HUVEC內(nèi)活性氧簇(ROS)的表達(dá)。 結(jié)果：白藜蘆醇(10μmol/L、50μmol/L)可以劑量依賴地減少單核細(xì)胞CCR2基因的表達(dá)(P<0.01)。TNF-α和sCD40L均可刺激HUVEC MCP-1分泌和ROS表達(dá)增加(P<0.05)，而白藜蘆醇(10μmol/L、50μmol/L)可抑制TNF-α和sCD4

5、0L活化HUVEC MCP-1的分泌(P<0.05)和細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生(P<0.01)。PMA誘導(dǎo)THP-1分化為巨噬細(xì)胞后，巨噬細(xì)胞內(nèi)MMP-9/TIMP-1基因轉(zhuǎn)錄、蛋白分泌明顯增加(P<0.01)，白藜蘆醇(10μmol/L、50gmol/L) 以并且以劑量依賴的方式抑制sCD40L刺激巨噬細(xì)胞MMP-9基因、蛋白的表達(dá)(P<0.01)，降低MMP-9酶活性(P<0.05)；并能夠逐漸升高巨噬細(xì)胞TIMP-1基因的轉(zhuǎn)錄(P<0.

6、05)和蛋白分泌(P<0.05)。 結(jié)論：白藜蘆醇可抑制單核細(xì)胞CCR2基因的表達(dá)和減少TNF-α或sCD40L誘導(dǎo)的HUVEC MCP-1的分泌，抑制對單核細(xì)胞的趨化；還可抑制活化的HUVEC內(nèi)ROS的產(chǎn)生，減少內(nèi)皮氧化損傷。白藜蘆醇可以通過CD40途徑抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)MMP-9的表達(dá)，并通過刺激TIMP-1的表達(dá)調(diào)節(jié)MMP-9的活性。提示白藜蘆醇可通過阻斷CD40途徑而抑制AS早期的炎癥反應(yīng)，具有保護(hù)血管內(nèi)皮和穩(wěn)定粥樣斑塊的作