超聲微泡介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的體內(nèi)實(shí)驗研究.pdf

1、已有報道，超聲微泡能明顯提高增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的效率。 目的：驗證超聲微泡介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞能否在體內(nèi)成功轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGCs），是否比傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方式效率高以及這種轉(zhuǎn)染方式是否損傷RGCs。 設(shè)計、時間及地點(diǎn)：基因形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗，于2008-01/07在重慶醫(yī)科大學(xué)超聲影像學(xué)研究所實(shí)驗室完成。 方法：將SD大鼠50只隨機(jī)分為4組：正常對照組（n=5）、單純質(zhì)粒組（

2、n=15）、質(zhì)粒+超聲組（n=15）、超聲微泡組（n=15）。正常對照組玻璃體腔注射5μL生理鹽水；單純質(zhì)粒組：注射5μL質(zhì)粒；質(zhì)粒+超聲組：注射5μL質(zhì)粒后，立即用0.5 W/c㎡超聲波輻照大鼠眼球60 s，工作時間控制為1/3（即輻照5s，停10 s，共60 s，其中輻照時間20s，）；超聲微泡組：注射質(zhì)粒微泡混懸液5μL后，立即用前述同等能量超聲波輻照大鼠眼球。7d后，取大鼠眼球制作視網(wǎng)膜鋪片、冰凍縱切片及視網(wǎng)膜EGFP mRNA

3、的RT-PCR。 主要觀察指標(biāo)：用熒光顯微鏡觀察鋪片及切片中EGFP在RGCs的表達(dá)情況。用RGCs計數(shù)觀察RGCs損傷情況[1-2]。用RT-PCR對EGFP mRNA進(jìn)行半定量檢測。 結(jié)果： 1.超聲微泡組轉(zhuǎn)染EGFP基因的效率明顯高于其他試驗組。 2.超聲微泡介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染RGCs的轉(zhuǎn)染方法對RGCs無明顯損傷。 結(jié)論：在低頻超聲波的照射下，超聲微泡能夠在體內(nèi)安全、有效地介導(dǎo)EGFP基