載睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-PEG-PLGA微泡聯(lián)合超聲對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分載睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子PEG-PLGA超聲微泡的制備及其特性檢測(cè)
　　 目的:
　　 1、采用雙乳化法制備載睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)的聚乙二醇-乳酸/羥基乙酸共聚物(PEG-PLGA)超聲微泡。
　　 2、檢測(cè)該微泡的粒徑、Zeta電位、平均包封率、平均載藥量及體外釋藥特性。
　　 方法:
　　 1、采用雙乳化法以PEG-PLGA為膜材制備包裹睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)的PEG-PLGA

2、的超聲微泡造影劑，簡(jiǎn)稱為CNTF-PEG-PLGA。
　　 2、應(yīng)用光學(xué)顯微鏡、透射電子顯微鏡分析微泡結(jié)構(gòu)及藥物分布情況;Malvern激光粒徑測(cè)量?jī)x測(cè)定微泡粒徑及Zeta電位;ELISA法檢測(cè)微泡的包封率、載藥量及體外釋放行為。
　　 結(jié)果:
　　 CNTF-PEG-PLGA超聲微泡造影劑形態(tài)圓整，表面光滑，透射電子顯微鏡下觀察無(wú)明顯粘連破損現(xiàn)象;激光粒徑儀檢測(cè)其平均粒徑為312.5 nm，Zeta電位-(25

3、.9±0.8)mv;平均包封率62.35％，平均載藥量0.298μg/mg;24h微泡有明顯的突釋現(xiàn)象，藥物釋放率為35.59％，之后微泡表現(xiàn)為溫和緩慢的持久釋放，28d時(shí)釋放百分率達(dá)93.6％。
　　 結(jié)論:
　　 采用雙乳化法成功制備了載睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-PEG-PLGA超聲微泡造影劑，該微泡粒徑小、均勻，具有緩釋長(zhǎng)效特性。
　　 第二部分載CNTF-PEG-PLGA微泡聯(lián)合超聲對(duì)視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)

4、胞的保護(hù)作用
　　 目的:
　　 探討載CNTF-PEG-PLGA微泡聯(lián)合超聲對(duì)視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 隨機(jī)選取SD大鼠145只（雙眼兼用），將其分為7組:A組正常對(duì)照組、B組單純損傷組、C組CNTF藥物組、D組超聲+CNTF藥物組、E組載CNTF-PEG-PLGA微泡組、F組超聲+空白PEG-PLGA微泡組、G組超聲+CNTF-PEG-PLGA微泡組。

5、采用視神經(jīng)鉗夾法制作大鼠視神經(jīng)損傷模型。造模前7天，應(yīng)用熒光金(FG)逆行標(biāo)記法對(duì)所有組大鼠RGCs進(jìn)行標(biāo)記，造模后1w、2w、4w分別計(jì)數(shù)各組大鼠RGCs存活數(shù)，視網(wǎng)膜組織病理切片觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，評(píng)價(jià)載藥微泡及聯(lián)合超聲的安全性;造模后3d、1w、2w、4w生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(GAP-43)免疫組織化學(xué)染色，觀察大鼠視網(wǎng)膜GAP-43的表達(dá)情況，表達(dá)強(qiáng)度以平均光密度(AOD)表示。
　　 結(jié)果:
　　 逆行熒光

6、金標(biāo)記RGCs結(jié)果顯示，視神經(jīng)損傷后1w、2w，G組、E組、D組及C組平均RGCs計(jì)數(shù)均高于B組和F組(P＜0.05);視神經(jīng)損傷后4w，G組平均RGCs計(jì)數(shù)仍高于B組和F組（P＜0.05）;在每個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)G組平均RGCs計(jì)數(shù)均顯著高于其他各損傷組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但仍低于A組（P＜0.05）。正常大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層GAP-43蛋白有少量表達(dá)，內(nèi)叢狀層微弱表達(dá);造模后各損傷組GAP-43表達(dá)均呈不同程度增強(qiáng)，主要

7、位于神經(jīng)纖維層、節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層。傷后3d，各損傷組GAP-43表達(dá)開始增強(qiáng)，傷后1w、2w、4w，G組GAP-43表達(dá)均明顯高于其他各組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。視網(wǎng)膜組織病理切片示，傷后各組大鼠視網(wǎng)膜RGCs均有不同程度排列疏松紊亂，空泡化，細(xì)胞數(shù)目減少。G組大鼠視網(wǎng)膜RGCs空泡化現(xiàn)象較其它各損傷組輕，細(xì)胞數(shù)目較多。玻璃體腔注射微泡后視網(wǎng)膜未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象及局灶性壞死。
　　 結(jié)論: