用免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)水稻中的白葉枯病菌.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一，白葉枯病是危害水稻最為嚴(yán)重的細(xì)菌性病害，在過(guò)去的十幾年中，多個(gè)水稻抗白葉枯病基因以及白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)的無(wú)毒基因的被克隆，水稻及Xoo的全基因組測(cè)序也已經(jīng)完成，所以水稻-白葉枯病菌互作體系是植病研究的重要模式系統(tǒng)，建立并優(yōu)化白葉枯病菌的檢測(cè)方法具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。免疫印跡(Western blot，WB)技術(shù)有使用方便、特異性強(qiáng)、靈敏

2、度高、假陽(yáng)性率低等特點(diǎn)，在植物和動(dòng)物病原物檢測(cè)中有重要的實(shí)用意義。
　　本研究以Xoo全蛋白質(zhì)為免疫原，制備了Xoo多克隆抗體，該抗體能夠識(shí)別所有受檢的Xoo小種，沒(méi)有Xoo小種特異性，與水稻、稻瘟病菌和大腸桿菌樣品沒(méi)有交叉反應(yīng)，所制備的抗體具有Xoo特異性。本研究建立了檢測(cè)Xoo的WB技術(shù)，檢測(cè)下限約為3500個(gè)Xoo細(xì)胞，并且WB信號(hào)與Xoo的量在一定范圍內(nèi)有線性關(guān)系。水稻接種Xoo菌后5-7天表型可見(jiàn)水稻感病，在本實(shí)驗(yàn)中，用

3、WB方法檢測(cè)Xoo，在人工接種Xoo后第一天，即可檢測(cè)到水稻中的Xoo，在接種后第2天，即可檢測(cè)到抗感反應(yīng)中Xoo數(shù)量的顯著區(qū)別。在水稻-Xoo不親和反應(yīng)中，接種后10天，Xoo僅存在于接種部位附近(6cm)的范圍內(nèi)，在水稻-Xoo親和反應(yīng)中，接種后10天，可在接種部位12cm范圍內(nèi)檢測(cè)到Xoo，而在距離接種部位更遠(yuǎn)的葉片和非接種葉片中，均不能檢測(cè)到Xoo信號(hào)，說(shuō)明抗病水稻品種對(duì)Xoo的繁殖具有更強(qiáng)的抑制作用。
　　免疫學(xué)技術(shù)為檢