抗CD137L單克隆抗體對系統(tǒng)性紅斑狼瘡鼠免疫干預(yù)的研究.pdf

1、目的：通過研究Pristane誘導(dǎo)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)模型鼠淋巴細胞表面共刺激信號的變化，進而探討體內(nèi)阻斷CD137/CD137L共刺激信號對SLE模型鼠疾病變化的影響。
　　方法：1.建立狼瘡鼠模型，雌性6-8周齡BALB/c鼠單次腹腔注射Pristane0.5ml，對照組BALB/c鼠注射PBS0.5ml。2.四溴酚藍指示劑法檢測BALB/c鼠尿蛋白含量、ELISA法檢測BALB/c鼠外周血自身抗體（抗ds-DNA、抗S

2、m/RNP）含量、HE染色評估BALB/c鼠病理學損傷，對狼瘡鼠模型進行鑒定。3.分離對照組和模型組小鼠外周血和脾臟淋巴細胞，采用流式細胞術(shù)（FCM）雙標記法檢測T細胞表面CD28、CD40L、CD137和B細胞表面CD40、CD137L分子的表達變化。4.免疫組化檢測對照組和模型組小鼠肺組織共刺激分子CD28、CD40L、CD137的表達。5.半定量RT-PCR檢測小鼠脾臟組織中細胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。6.運用抗C

3、D137L單克隆抗體進行體內(nèi)免疫干預(yù)：Pristane注射三個月后，小鼠隨機分為四組，分別尾靜脈注射抗CD137L單克隆抗體0、10、50、100ug，PBS注射組小鼠注射適量生理鹽水。每周1次，共計3次。7.不同劑量干預(yù)組小鼠與對照組小鼠生物學鑒定及病理學檢查：尿蛋白試紙法檢測尿蛋白含量、ELISA法檢測外周血自身抗體（抗ds-DNA、抗Sm/RNP）含量、HE染色評估病理學損傷。8.熒光定量PCR檢測不同劑量干預(yù)組小鼠與對照組小鼠脾

4、臟組織中細胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。
　　結(jié)果：1. Pristane成功誘導(dǎo)SLE小鼠模型：?模型組小鼠1個月時開始出現(xiàn)蛋白尿，且隨月份增加蛋白尿陽性率逐漸升高；對照組小鼠尿蛋白基本為陰性。?模型組小鼠血清抗Sm/RNP抗體和抗ds-DNA抗體分別于第三、四個月時明顯高于對照組，并維持高水平狀態(tài)至處死；對照組小鼠基本保持不變。?模型組小鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹和面部―紅斑‖；對照組小鼠無異常改變。④HE染色，模型組小鼠肺、

5、肝臟和腎臟出現(xiàn)不同程度的病理學改變。2.流式結(jié)果顯示，模型組小鼠外周血T細胞表面共刺激分子CD28一個月時表達升高后逐漸下降至低于正常對照組（P<0.01）；T細胞表面CD40L的表達變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05），B細胞表面共刺激分子CD40三個月時表達升高，六個月時表達下降至低于正常對照組（P<0.05）；共刺激分子CD137、CD137L三個月時表達增高并維持高表達狀態(tài)至處死（P<0.05）。對照組小鼠外周血淋巴細胞表面共刺激分

6、子表達變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。小鼠脾臟淋巴細胞表面共刺激分子CD28、CD40L/CD40和CD137/CD137L的表達變化與外周血基本一致。3.免疫組化結(jié)果顯示，共刺激分子CD28、CD40L和CD137在模型組小鼠肺組織細胞中表達陽性，但在對照組小鼠肺組織基本無表達。4.RT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比模型組小鼠脾臟組織中細胞因子TNF-α、IFN-γ mRNA水平升高。5.抗CD137L單克隆抗體干預(yù)后，狼瘡鼠的部分