腦缺血小鼠大腦皮層CD4、CD8免疫反應(yīng)觀察及脾T淋巴細(xì)胞亞群變化.pdf

1、背景和目的：免疫機(jī)制與中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、腫瘤、缺血以及退變性疾病密切相關(guān)。急性缺血性腦卒中是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性損傷性病變，有研究表明，免疫機(jī)制參與了缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展過程。腦缺血時(shí)，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞，浸潤的外周血多形核白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞介入腦缺血性損傷的病理過程外，機(jī)體的免疫細(xì)胞水平也有變化。當(dāng)T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能異常時(shí)，機(jī)體可產(chǎn)生免疫紊亂而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病。T細(xì)胞亞群與腦缺血的聯(lián)系近年來倍受重視。本實(shí)驗(yàn)研究的

2、主要目的在于觀察腦缺血后腦組織淋巴細(xì)胞浸潤情況及脾臟T細(xì)胞亞群的變化，探討淋巴細(xì)胞及其亞群在缺血性腦損傷中的作用。 方法：研究對(duì)象為健康成年雄性Balb/c小鼠，光化學(xué)法建立小鼠局灶性腦缺血模型，分為對(duì)照組、單純光敏劑組和腦缺血組，各組又分為腦缺血后6h、1d、3d和7d四個(gè)亞組。在處死前半小時(shí)，無菌條件下取出脾臟，制備單個(gè)核細(xì)胞懸液，用于流式細(xì)胞儀檢測脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+的比值。在相應(yīng)時(shí)間

3、點(diǎn)處死動(dòng)物，通過Nissl染色觀察受損腦區(qū)皮層的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測皮層CD4和CD8陽性細(xì)胞的反應(yīng)。 結(jié)果：Nissl染色顯示：對(duì)照組和單純光敏劑組皮層無損傷，細(xì)胞分布和形態(tài)均正常，兩組之間無差異。與對(duì)照組相比，缺血組6h就出現(xiàn)損傷區(qū)，1d和3d可見梗死區(qū)與周圍正常腦組織有一明顯的分界線，缺血周邊皮層神經(jīng)元數(shù)量明顯減少。7d可見損傷周圍有大量細(xì)胞浸潤。免疫組織化學(xué)染色顯示：單純光敏劑組與對(duì)照組無差異。腦缺血組與對(duì)照

4、組相比，CD8免疫組織化學(xué)染色3d時(shí)可見圓形、無明顯突起細(xì)胞和分支狀突起的陽性細(xì)胞(P＜0.05)，主要分布于缺血周邊區(qū)。7d時(shí)陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加(P＜0.001)。CD4免疫組織化學(xué)染色在對(duì)照組、單純光敏劑組和腦缺血組均為陰性。流式細(xì)胞儀檢測脾臟T淋巴細(xì)胞亞群，與對(duì)照組相比，腦缺血組CD4+T淋巴細(xì)胞百分率在6h、1d和3d時(shí)明顯降低(P＜0.001)，CD8+T淋巴細(xì)胞百分率在6h、1d和3d時(shí)降低(P＜0.05)。CD4+/CD

5、8+的比值在6h、3d和7d降低(P＜0.05)，在1d時(shí)顯著降低(P＜0.001)。 結(jié)論：1.在腦缺血超早期(6h內(nèi))，缺血中心區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，提示缺血一旦發(fā)生，即很快對(duì)腦細(xì)胞產(chǎn)生影響。因此，缺血性腦梗塞一旦發(fā)生應(yīng)及早救治，才能更有效地挽救半暗帶神經(jīng)元。 2.腦缺血周邊區(qū)CD8抗原的高表達(dá)，啟動(dòng)局灶的免疫反應(yīng)。提示腦缺血的組織損傷過程有免疫反應(yīng)參與。CD4抗原在本實(shí)驗(yàn)未觀察到陽性表達(dá)，在腦缺血損傷中的作用還需