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文檔簡介
1、背景和目的:免疫機(jī)制與中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、腫瘤、缺血以及退變性疾病密切相關(guān)。急性缺血性腦卒中是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性損傷性病變,有研究表明,免疫機(jī)制參與了缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展過程。腦缺血時(shí),激活的小膠質(zhì)細(xì)胞,浸潤的外周血多形核白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞介入腦缺血性損傷的病理過程外,機(jī)體的免疫細(xì)胞水平也有變化。當(dāng)T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能異常時(shí),機(jī)體可產(chǎn)生免疫紊亂而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病。T細(xì)胞亞群與腦缺血的聯(lián)系近年來倍受重視。本實(shí)驗(yàn)研究的
2、主要目的在于觀察腦缺血后腦組織淋巴細(xì)胞浸潤情況及脾臟T細(xì)胞亞群的變化,探討淋巴細(xì)胞及其亞群在缺血性腦損傷中的作用。 方法:研究對(duì)象為健康成年雄性Balb/c小鼠,光化學(xué)法建立小鼠局灶性腦缺血模型,分為對(duì)照組、單純光敏劑組和腦缺血組,各組又分為腦缺血后6h、1d、3d和7d四個(gè)亞組。在處死前半小時(shí),無菌條件下取出脾臟,制備單個(gè)核細(xì)胞懸液,用于流式細(xì)胞儀檢測脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+的比值。在相應(yīng)時(shí)間
3、點(diǎn)處死動(dòng)物,通過Nissl染色觀察受損腦區(qū)皮層的形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色檢測皮層CD4和CD8陽性細(xì)胞的反應(yīng)。 結(jié)果:Nissl染色顯示:對(duì)照組和單純光敏劑組皮層無損傷,細(xì)胞分布和形態(tài)均正常,兩組之間無差異。與對(duì)照組相比,缺血組6h就出現(xiàn)損傷區(qū),1d和3d可見梗死區(qū)與周圍正常腦組織有一明顯的分界線,缺血周邊皮層神經(jīng)元數(shù)量明顯減少。7d可見損傷周圍有大量細(xì)胞浸潤。免疫組織化學(xué)染色顯示:單純光敏劑組與對(duì)照組無差異。腦缺血組與對(duì)照
4、組相比,CD8免疫組織化學(xué)染色3d時(shí)可見圓形、無明顯突起細(xì)胞和分支狀突起的陽性細(xì)胞(P<0.05),主要分布于缺血周邊區(qū)。7d時(shí)陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加(P<0.001)。CD4免疫組織化學(xué)染色在對(duì)照組、單純光敏劑組和腦缺血組均為陰性。流式細(xì)胞儀檢測脾臟T淋巴細(xì)胞亞群,與對(duì)照組相比,腦缺血組CD4+T淋巴細(xì)胞百分率在6h、1d和3d時(shí)明顯降低(P<0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞百分率在6h、1d和3d時(shí)降低(P<0.05)。CD4+/CD
5、8+的比值在6h、3d和7d降低(P<0.05),在1d時(shí)顯著降低(P<0.001)。 結(jié)論:1.在腦缺血超早期(6h內(nèi)),缺血中心區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少,提示缺血一旦發(fā)生,即很快對(duì)腦細(xì)胞產(chǎn)生影響。因此,缺血性腦梗塞一旦發(fā)生應(yīng)及早救治,才能更有效地挽救半暗帶神經(jīng)元。 2.腦缺血周邊區(qū)CD8抗原的高表達(dá),啟動(dòng)局灶的免疫反應(yīng)。提示腦缺血的組織損傷過程有免疫反應(yīng)參與。CD4抗原在本實(shí)驗(yàn)未觀察到陽性表達(dá),在腦缺血損傷中的作用還需
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