褪黑素對(duì)哮喘小鼠CD4+T淋巴細(xì)胞免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：通過(guò)使用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支氣管哮喘小鼠動(dòng)物模型，設(shè)立不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，探討褪黑素(MT)對(duì)哮喘小鼠CD4+T淋巴細(xì)胞免疫功能的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：選擇40只6周齡SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、哮喘組、褪黑素組、地塞米松(DXM)組，每組10只。采用卵清蛋白致敏方法建立支氣管哮喘小鼠動(dòng)物模型。藥物治療組以褪黑素及地塞米松溶液腹腔注射；正常對(duì)照組與哮喘組以等量生理鹽水腹腔注射。各

2、組小鼠末次霧化吸入24 h內(nèi)，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察氣道炎癥浸潤(rùn)情況；支氣管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色計(jì)數(shù)炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)各組小鼠外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)目；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定外周血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的水平；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)肺組織中T-bet、ROR-γt、GATA3、 Foxp3mRNA表達(dá)水平的含量。
　　結(jié)果：(

3、1)成功建立哮喘小鼠動(dòng)物模型，各組小鼠肺組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組結(jié)構(gòu)清晰，各級(jí)支氣管上皮完整，肺泡間隔正常，基本無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；哮喘組小鼠支氣管黏膜增厚，皺襞增多，管腔明顯狹窄， 氣道上皮損傷、脫落明顯，氣道內(nèi)可見(jiàn)黏液栓，氣道周圍組織疏松水腫，細(xì)支氣管及伴行血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞，杯狀細(xì)胞增生；褪黑素組和地塞米松組與哮喘組相比，支氣管和血管周圍炎癥明顯減輕，與對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異。(2)與正常

4、對(duì)照組相比較，哮喘組氣道炎癥、BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)目、血清中IL-4水平以及肺組織中ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯增高(p<0. 05)，血清IL-2和IFN-γ水平以及肺組織中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯降低(p<0. 05)。與哮喘組比較，治療組氣道炎癥、BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)目、血清中IL-4水平以及肺組織中

5、ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表達(dá)水平均明顯降低(p<0. 05)，而血清IL-2和IFN-γ水平以及肺組織中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯增高(p<0. 05)。兩治療組比較， T-bet、Foxp3mRNA蛋白表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，余各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯差異(p>0. 05)。
　　結(jié)論：(1)褪黑素可抑制哮喘小鼠的氣道炎癥，其抑制作用可能與抑制炎癥細(xì)胞和EOS細(xì)胞的表達(dá)有關(guān)。(2)褪黑素有效減少哮喘小鼠外周