大鼠二氧化碳?xì)飧购笪刚衬ぴ俟嘧p傷及異丙酚的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 觀察大鼠二氧化碳?xì)飧购笠鸬奈刚衬ぴ俟嘧p傷并探討異丙酚對(duì)胃粘膜缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。 材料和方法： 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年雄性Wistar大鼠(由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供)280～320克左右，實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)，自由飲水。實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行1星期的適應(yīng)性喂養(yǎng)。 二、動(dòng)物分組 24只隨機(jī)分成4組，每組6只。 A組：對(duì)照組，尾靜脈泵注生理鹽水(10ml/kg/h)1h，同

2、時(shí)保持0氣腹壓。 B組：缺血組，在A組基礎(chǔ)上給予20mmHg氣腹壓力1h。 C組：再灌注組，處置同B組，氣腹1h后，保持無氣腹壓0.5h。 D組：保護(hù)組，20mmHg氣腹1h，無氣腹0.5h，整個(gè)過程中尾靜脈泵注1mg/ml的異丙酚10ml/kg/h(異丙酚原液用生理鹽水做10倍稀釋而成)。 三、實(shí)驗(yàn)方法 10％水合氯醛(3 ml/kg體重)腹腔注射麻醉。然后將動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)，尾靜脈穿刺，以備泵

3、注異丙酚或生理鹽水。腹部酒精消毒，于臍上將氣腹針插入腹腔內(nèi)。A組不向腹腔內(nèi)充入CO2，保持O氣腹壓1h；B、C、D組充入CO2，并使氣腹壓力維持在20mmHg。A、B、C組均泵注生理鹽水10ml/kg/h；D組泵注異丙酚10mg/kg/h，異丙酚原液(10mg/ml)用生理鹽水做10倍稀釋。C，D組在氣腹1h后，停止氣腹，保持0氣腹壓0.5h，每組泵注液體種類及時(shí)間，以及氣腹壓力、氣腹時(shí)間和氣腹后時(shí)間見表1。 四、觀察指標(biāo)及生化

4、檢測(cè) 1、形態(tài)學(xué)指標(biāo) (1)胃粘膜光鏡：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)開腹，迅速游離全胃，沿大彎部剖開，冷生理鹽水漂洗內(nèi)容物，在腺胃區(qū)中部病變明顯部位取2×3mm胃粘膜用10％甲醛固定24-48h，待做光鏡標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋，行4um切片，HE染色。 (2)胃粘膜透射電鏡：胃粘膜標(biāo)本獲得方式同(1)，取1×0.5mm胃粘膜置于2.5％的戊二醛雙蒸水固定液中，4℃冰箱保存，待做電鏡標(biāo)本。 2、生化學(xué)指標(biāo) (1)超氧化物

5、歧化酶SOD：胃粘膜標(biāo)本置于液氮中迅速冷凍備用。統(tǒng)一稱重后置4℃生理鹽水中，制備為10％勻漿，4℃、100000r/min離心15min，分離上清液，-80℃保存。用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用比色測(cè)定其吸光度，結(jié)果以亞硝酸鹽單位表示。 (2)丙二醛(MDA)：標(biāo)本制備同上。用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定。利用過氧化脂質(zhì)主要降解產(chǎn)物丙

6、二醛在酸性條件下兩分子硫代巴比妥縮合生成紅色物質(zhì)，于532nm比色測(cè)定。 (3)一氧化氮(NO)：標(biāo)本制備同上。用硝酸還原酶法測(cè)定。NO化學(xué)性質(zhì)活潑，在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO2-和NO3-，而NO2-又進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為NO3-，利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原為NO2-，通過顯色深淺測(cè)定其濃度的高低。 (4)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)：標(biāo)本制備同上。GSH-PX可以促進(jìn)過氧化氫與還原型谷胱甘肽反應(yīng)生成水及氧化型谷胱甘

7、肽，GSH-PX的活力可用其酶促反應(yīng)的速度來表示，測(cè)定此酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。 各指標(biāo)的檢測(cè)均按試劑盒使用說明操作進(jìn)行。 五、統(tǒng)計(jì)分析 用使SPSS13.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用t檢驗(yàn)分析。P<0.05認(rèn)為差別具有顯著性意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一、各組光鏡結(jié)果比較A組：正常胃粘膜組織。 B組：粘膜下層少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，胃粘膜表面有些輕

8、度糜爛。 C組：胃粘膜凹陷，形成淺潰瘍，粘膜下層炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 D組：炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，胃粘膜表面比較平整光滑，接近正常胃粘膜組織。 二、各組透射電鏡結(jié)果比較 A組：壁細(xì)胞內(nèi)大量的細(xì)胞內(nèi)小管及正常線粒體，核膜光滑。 主細(xì)胞內(nèi)大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及一些正常結(jié)構(gòu)線粒體。 B組：壁細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)少數(shù)線粒體有絮狀改變，細(xì)胞核核型不規(guī)則，微管泡系統(tǒng)有所減少。 主細(xì)胞核形不規(guī)則，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線粒體水腫，

9、基質(zhì)密度下降，外形模糊，內(nèi)有絮狀物改變。 C組：壁細(xì)胞核形不規(guī)則，異染色質(zhì)邊集，微管泡減少，胞質(zhì)內(nèi)見有髓鞘樣結(jié)構(gòu)，線粒體外膜破損，核膜腫脹。 主細(xì)胞：核膜腫脹，異染色質(zhì)邊集，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度擴(kuò)張。 D組：壁細(xì)胞微管泡系統(tǒng)開始增多。 主細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹相對(duì)減輕。 三、生化指標(biāo) 再灌注組MDA升高，SOD，NO，GSH-PX降低，與其它各組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。異丙酚組與再灌注組相比，MDA降低