過度訓練大鼠腎組織IL-6、IL-18、凝血因子Ⅷ相關抗原的表達及山莨菪堿干預的影響.pdf

1、目的：過度訓練可以引起機體組織器官的損傷，如何防治運動引起的臟器損傷是目前運動醫(yī)學、軍事醫(yī)學及臨床醫(yī)學關注的課題。本研究采用大鼠游泳至力竭的方法，建立過度訓練致急性腎損傷(over-training induced acute kidneyinjury，OTIAKI)動物模型，研究大鼠力竭后不同時間腎組織中IL-6、IL-18、凝血因子Ⅷ相關抗原(FⅧRAg)表達的變化，觀察山莨菪堿對上述指標的影響，旨在加深對OTIAKI發(fā)病機制的認識

2、，為臨床OTIAKI的防治提供新的理論和實驗依據。 方法：1.分組雄性健康Wistar大鼠36只，體重200～220g，隨機分為6組：安靜對照組(CN組，平時不運動)；力竭運動后即刻組(ESI組，力竭運動后即刻采集標本)；力竭運動后6小時組(ES 6h組，力竭運動后6小時采集標本)；力竭運動后24小時組(ES 24h組，力竭運動后24小時采集標本)；山莨菪堿6小時組(AD 6h組，游泳前20min于腹腔內注射山莨菪堿(10mg/

3、kg)，力竭運動后6小時采集標本)；山莨菪堿24小時組(AD 24h組，游泳前20min于腹腔內注射山莨菪堿(10mg/kg)，力竭運動后24小時采集標本)。2.建立動物模型采用大鼠游泳至力竭法建立OTIAKI動物模型，各實驗組大鼠于實驗第一天適應性游泳30min，第二天放于水中，無負重游泳至力竭。力竭的標準為：①沉入水底超過10秒②游泳動作明顯不協(xié)調；③撈出后沒有逃避反應，且放在平面無法完成翻正反射(個別大鼠有假死的現象，要注意判斷)

4、。3.取材各組大鼠于相應的時間點用乙醚麻醉，麻醉理想后于腹部正中切開，取左腎置入4℃4％多聚甲醛中固定，備行石蠟切片；取右腎置于液氮中封存，備行IL-6、IL-18的酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測。4.觀察指標常規(guī)制作石蠟切片，采用HE染色光鏡下觀察腎組織形態(tài)學變化：用ELISA法檢測大鼠力竭后不同時間點的腎組織勻漿中IL-6、IL-18的含量；應用免疫組織化學(PV)法檢測FⅧRAg在腎組織中的表達；應用圖像分析系統(tǒng)對免疫組織化學結果進

5、行半定量分析。5.統(tǒng)計學處理所有實驗數據用均數±標準差(x±S)表示，用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學處理，組間差異用one-way ANOVA(單因素方差分析)，有顯著差異者用Student-Newmalq-Keuls test(q檢驗)進行兩兩比較，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。 結果：1.安靜對照組大鼠腎組織中IL-6少量表達，力竭運動后即刻組增高(P＜0.05)；力竭運動后6小時組、力竭運動24小時組與安靜對照組

6、相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，山莨菪堿組與單純力竭組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2.安靜對照組大鼠腎組織中IL-18少量表達，力竭運動后即刻組顯著增高(P＜0.01)，力竭運動后6小時組繼續(xù)增高(P＜0.05)，力竭運動后24小時組有所下降但仍高于對照組(P＜0.05)。與單純力竭組比較山莨菪堿組大鼠腎組織中IL-18水平明顯減低(P＜0.05)。3.免疫組化結果顯示，FⅧRAg在安靜對照組大鼠腎組織中有輕度表達，

7、光鏡下可見小管周圍有散在的棕紅色短線形物質，判定為毛細血管，力竭運動后即刻組無明顯變化。力竭運動后6小時組、力竭運動后24小時組棕紅色物質增多，山莨菪堿組棕紅色物質增多并可見棕紅色橢圓形套索，考慮為開放的毛細血管。圖像分析統(tǒng)計結果顯示，力竭運動后即刻組與安靜對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，力竭運動后6小時組增多(P＜0.05)，力竭運動后24小時組達到高峰(P＜0.05)。與單純力竭組比較山莨菪堿組大鼠腎組織中FⅧRAg水平

8、顯著增多(P＜0.05)。 結論：1.力竭后即刻大鼠腎組織IL-6、IL-18表達增高，力竭后6小時IL-6表達恢復，而IL-18表達增高更加明顯，力竭后24小時IL-8的表達也有所恢復，說明炎癥反應在過度訓練致大鼠腎損傷早期發(fā)揮重要作用。2.力竭后6小時大鼠腎組織FⅧRAg表達增高，24小時達到高峰，提示力竭運動后腎臟能通過增加毛細血管密度來恢復血供，這可能是細胞沒有發(fā)生壞死而走向凋亡的重要機制之一。3.山莨菪堿能降低OTIA