過度訓練大鼠腎組織TLR4及Fas的表達及山莨菪堿干預的影響.pdf

1、目的：本課題組以往研究表明，腎小管上皮細胞凋亡是過度訓練所致急性腎損傷(overtraining-induced acute kidney injury，OTIAKI)的主要病理特征，預先給予山莨菪堿可以抑制腎組織細胞的過度凋亡進而減輕腎損傷，但其確切的分子機制尚不清楚。TLRs(Toll-like receptors)是天然免疫系統(tǒng)中特異的跨膜受體及病原模式識別受體，作為連接天然免疫與獲得性免疫的“橋梁”，其在宿主防御反應中起到重要作

2、用。其中TLR4作為一個“損傷敏感性高度表達”的蛋白質(zhì)，在急性腎損傷模型中高度表達并誘導炎癥反應和細胞凋亡。本研究采用大鼠游泳至力竭模型，觀察過度訓練大鼠腎組織細胞凋亡率和腎小管上皮細胞TLR4和Fas表達的變化以及山莨菪堿干預的影響，探討TLR4在OTIAKI中的作用及山茛菪堿抑制腎臟細胞凋亡的分子機制，為防治過度訓練所致急性腎損傷提供新的思路。
　　方法：(1)選擇48只健康雄性SD大鼠，體重200～220g。按隨機數(shù)字表隨機

3、分為三組：安靜對照組(contol，CN，n=8)、力竭運動組(exhaustive swimming，ES，n=24)、山莨菪堿干預組(Anisodamine，AD，n=16)。(2)采用大鼠無負重游泳至力竭建立過度訓練引起急性腎損傷模型。(3)采用免疫組織化學法及TUNEL法觀察腎臟組織TLR4的表達及細胞凋亡率的變化；Western Blotting法和RT-PCR法檢測TLR4蛋白、Fas蛋白及TLR4mRNA的表達。(4)統(tǒng)計

4、分析：所有實驗數(shù)據(jù)均采用CHISS軟件進行統(tǒng)計學處理，實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(X±s)表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)分析，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)檢驗，以P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果：(1)正常對照組大鼠行動靈活、精神佳、反應靈敏、飲食正常；力竭運動組大鼠癱軟無力、精神萎靡、反應淡漠、飲食減少；山茛菪堿組大鼠一般狀況優(yōu)于同期力竭運動組。(2)正常對照組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)未見明顯變化，腎小管上皮

5、細胞凋亡率、TLR4蛋白、Fas蛋白、TLR4mRNA均僅為弱表達。力竭運動組大鼠腎組織病理改變逐漸加重，腎小管上皮細胞凋亡率、TLR4蛋白、Fas蛋白、TLR4mRNA的表達隨力竭后恢復時間的延長均逐漸增強，同正常對照組相比均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。山莨菪堿干預組腎組織病理改變輕微，各指標表達均低于同期單純力竭組(P<0.05)。(3)相關(guān)性分析結(jié)果：相關(guān)性分析結(jié)果：過度訓練大鼠腎組織TLR4蛋白與Fas蛋白、腎組織細胞凋亡率分